甲鈷胺、葉酸對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的影響.pdf

1、目的：腦缺血可引起神經(jīng)細(xì)胞壞死、凋亡及神經(jīng)纖維髓鞘脫失，導(dǎo)致腦功能障礙。研究發(fā)現(xiàn)高同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)血癥是腦卒中的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。腦梗死患者血漿hcy水平升高，且與葉酸、甲鈷胺水平呈負(fù)相關(guān)。甲鈷胺和葉酸可能降低血中Hcy水平，增加ERK活性，保護(hù)腦組織。另外，大量實(shí)驗(yàn)顯示甲鈷胺可促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)髓鞘損傷的恢復(fù)，但其機(jī)制尚有爭(zhēng)議。本研究制備腦組織再灌注模型，通過(guò)檢測(cè)甲鈷胺和葉酸治療前后不同時(shí)期腦梗死面積、凋

2、亡細(xì)胞數(shù)、血漿中Hcy含量、腦組織中ERK的活性，進(jìn)一步探討甲鈷胺、葉酸對(duì)腦缺血損傷的保護(hù)作用。 方法：采用大腦中動(dòng)脈線栓法建立預(yù)缺血大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，SD大鼠50只，體重200～300g，隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血再灌注組、甲鈷胺預(yù)處理缺血再灌注組、葉酸預(yù)處理缺血再灌注組、甲鈷胺聯(lián)合葉酸預(yù)處理缺血再灌注組。動(dòng)物模型制備：采用線栓法，大鼠用10％水合氯醛腹腔注射麻醉，用特制的尼龍線阻斷大腦中動(dòng)脈血流，3h后抽出栓線，形成再

3、灌注，再灌注3、6、24、72h后處死。假手術(shù)組僅暴露頸總動(dòng)脈及分叉處，不插線阻斷大腦中動(dòng)脈。各組動(dòng)物術(shù)中均用加熱板使其肛溫維持在37℃左右，術(shù)后單籠飼養(yǎng)。預(yù)處理組于動(dòng)物清醒后立即給予甲鈷胺、葉酸、甲鈷胺+葉酸灌胃治療，預(yù)先4周，每天2次灌胃。 本實(shí)驗(yàn)①測(cè)定梗死面積：各組大鼠分別于再灌注3、6、24、72h后處死。屆時(shí)斷頭取腦，立即做冠狀切片，放入2％TTC磷酸鹽緩沖液中染色，各個(gè)腦片攝像，用LUZEX-F圖像分析軟件計(jì)算出梗死

4、面積。②檢測(cè)凋亡細(xì)胞數(shù)：玻片脫蠟、乙醇水化，滴加TUNEL染色緩沖液,DAB顯色后，在光鏡400倍下選擇6個(gè)具有代表性的視野，計(jì)數(shù)1mm<'2>陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。③不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定血漿中Hcy含量④免疫印跡法測(cè)定ERK的活性：取出全腦，分離出背側(cè)海馬約100mg，勻漿后超聲粉碎，離心，轉(zhuǎn)膜，用過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗孵育，X光片上的顯色條帶進(jìn)行光密度掃描半定量分析。 結(jié)果：葉酸、甲鈷胺預(yù)處理組的腦梗死面積、細(xì)胞凋亡數(shù)、Hcy含量均比缺血組減