雷帕霉素對(duì)肝臟移植受者外周血CD4+CD25highFOXP3+T細(xì)胞數(shù)量和功能的影響.pdf

1、目的：器官移植的理想狀態(tài)是免疫耐受,即在停用免疫抑制劑后不僅能維持移植物功能,但同時(shí)保留受者對(duì)外源性抗原的免疫應(yīng)答。部分器官移植受者在停用免疫抑制劑后并未出現(xiàn)移植物排斥反應(yīng),特別是在肝移植受者中較常見。研究表明CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell,Tregs)介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)在誘導(dǎo)移植物免疫耐受中起重要作用。Tregs能下調(diào)機(jī)體對(duì)同種異體抗原的免疫應(yīng)答。Tregs細(xì)胞在維持外周免疫耐受及穩(wěn)定中起到了關(guān)鍵作用。

2、影響Tregs細(xì)胞發(fā)育及活性發(fā)揮的因素很多,新近發(fā)現(xiàn)的叉頭/翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子(forkhead box P3,小鼠為Foxp3,人類為FOXP3),因其直接主控Tregs細(xì)胞表型及活性,在機(jī)體自身免疫的穩(wěn)定中起到了決定性作用,成為研究Tregs細(xì)胞調(diào)控的焦點(diǎn)。本研究應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)了不同免疫抑制方案(雷帕霉素、鈣調(diào)蛋白抑制劑)肝移植受者外周血Tregs數(shù)量及FOXP3 mRNA表達(dá),同時(shí)體外分析研究CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的

3、免疫抑制功能,旨在探索不同免疫抑制劑對(duì)肝移植受者外周血CD4+CD25highFOXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量和功能的影響,Tregs細(xì)胞角度證實(shí)何種免疫抑制劑有利于肝移植受者免疫耐受的建立,從而為臨床更為合理選用免疫抑制方案提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1、選擇47例應(yīng)用不同免疫抑制方案肝移植受者(肝功能穩(wěn)定大于2年)和38例年齡性別相配的健康人群作為正常對(duì)照組,肝移植受者免疫抑制方案分2組[雷帕霉素組15例,鈣調(diào)蛋

4、白抑制劑組(他克莫司)32例]。流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞CD4、CD25和FOXP3的表達(dá)水平。比較各組之間外周血Tregs水平的差異。
　　 2、采用Real time PCR.分析上述肝移植受者和健康人群外周血單個(gè)核細(xì)胞FOXP3mRNA表達(dá)水平。
　　 3、通過對(duì)上述肝移植受者外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞抑制CD4+CD25.T淋巴細(xì)胞功能與健康人群外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞抑制

5、CD4+CD25-T淋巴細(xì)胞功能對(duì)比的分析,探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞在不同免疫抑制劑的影響下功能有無障礙,同時(shí)探討何種免疫抑制劑有利于免疫耐受的建立。
　　 結(jié)果：外周血Tregs占總淋巴細(xì)胞的比例,雷帕霉素組顯著高于鈣調(diào)蛋白抑制劑組和正常對(duì)照組,鈣調(diào)蛋白抑制劑組顯著低于正常對(duì)照組。雷帕霉素組顯著高于鈣調(diào)蛋白抑制劑組和正常對(duì)照組[0.50％(0.42 to0.86)vs.0.15％(0.12 to0.22)vs.0

6、.22％(0.12 to0.49),P＜0.01],鈣調(diào)蛋白抑制劑組顯著低于正常對(duì)照組(P=0.03)。大于95％CD4+CD25highT細(xì)胞、小于20％的CD4+CD25lowT細(xì)胞和O％的CD4+CD25-T細(xì)胞表達(dá)FOXP3。采用Real time PCR研究分析在應(yīng)用不同免疫抑制方案肝移植受者和正常對(duì)照組外周血單個(gè)核細(xì)胞FOXP3mRNA的表達(dá)。雷帕霉素組顯著高于鈣調(diào)蛋白抑制劑組和正常對(duì)照組,鈣調(diào)蛋白抑制劑組FOXP3mRNA

7、表達(dá)顯著低于健康對(duì)照組(P＜0.01),均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分選的CD4+CD25+及CD4+CD25-T細(xì)胞在不同的比例下進(jìn)行培養(yǎng),MTT法測(cè)定A值并進(jìn)行抑制率的計(jì)算,發(fā)現(xiàn)無論是何種免疫抑制方案的肝移植受者還是健康人群,當(dāng)CD4+CD25+和CD4+CD25-T細(xì)胞的比例為1:1時(shí)有最大的抑制率。與健康對(duì)照者的CD4+CD25+Tregs細(xì)胞的增殖能力相比,肝移植受者CD4+CD25+Tregs細(xì)胞的增殖能力無明顯差異(P＞0.05),

8、從不同免疫抑制方案的肝移植受者分離的Tregs細(xì)胞對(duì)健康人群分離的效應(yīng)細(xì)胞的增殖抑制力無明顯差異。
　　 結(jié)論：不同免疫抑制方案對(duì)肝移植受者外周血Tregs的數(shù)量產(chǎn)生不同的影響。從調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的角度雷帕霉素更有助于肝移植受者產(chǎn)生免疫耐受,然而鈣調(diào)蛋白抑制劑阻礙免疫耐受的建立。本實(shí)驗(yàn)研究表明,外周血Tregs的水平與FOXP3mRNA在外周血單個(gè)核細(xì)胞的表達(dá)呈正相關(guān)。不同免疫抑制劑的肝移植受者外周血CD4+CD25high FOX