轉染IKK2dn的受者樹突狀細胞誘導產生的CD4+CD25-T細胞延長腎移植大鼠生存時間的研究.pdf

1、目的:建立大鼠同種異體腎移植的急性排斥反應動物模型，觀察轉染重組腺病毒介導的IKK2dn（recombinantadenovirus-mediatedIKK2dn，Adv-IKK2dn）基因并負載供者抗原的受者樹突狀細胞（dendriticcells，DC）誘導產生的CD4+CD25-T細胞回輸是否延長同種異體腎移植大鼠的生存時間，并探討其機制。
　　 方法:應用5ng/ml大鼠源性粒細胞一巨噬細胞集落刺激因子(granuloc

2、ytemacrophagecolonystimulatingfactor，GM-CSF)和5ng/ml大鼠源性白細胞介素4(interleukin-4，IL-4)誘導Lewis大鼠（受者）骨髓源性細胞分化為未成熟DC(immaturedendriticcells，imDC)。收集第5d細胞，Adv-IKK2dn轉染DC,48h后收集細胞與BN大鼠（供者）抗原肽共孵育,48h后收集懸浮的細胞為轉染IKK2dn并負載供者抗原的受者DC。將轉

3、染IKK2dn并負載供者抗原的受者DC與受者T細胞混合淋巴細胞反應(mixedlymphocytereaction，MLR)，共培養(yǎng)72h后，采用免疫磁珠分離法(magneticactivatedcellsorting，MACS)分選CD4+CD25-T細胞，體外擴增培養(yǎng)。腎移植受者為Lewis大鼠，分為初始T細胞組、AdvO-CD4+T細胞組、CD4+CD25-T細胞組、排斥組，術前7d分別輸注1×107個初始CD4+T細胞、Adv-

4、0-DC誘導產生的CD4+CD25-T細胞、Adv-IKK2dn-DC誘導產生的CD4+CD25-T細胞和等量生理鹽水，供者均為BN大鼠。另設第三方供者組，術前處理同CD4+CD25-T細胞組，供者為Wistar大鼠。移植術后觀察各組大鼠生存時間;測定受者T淋巴細胞增殖能力;檢測血清白細胞介素2(interleukin-2，IL-2)、白細胞介素10（interleukin-10，IL-10）、γ干擾素(interferon-γ，IFN

5、-γ)以及轉化生長因子-β(transforminggrowthfactor-β，TGF-β)表達水平;監(jiān)測血清肌酐水平;移植腎的病理學檢查，判斷排斥反應程度。
　　 結果:1、流式細胞儀檢測第5dDC表型:CD80、CD86、MHC-Ⅱ的陽性表達率較低，分別為19.0±2.01％，17.3±1.17%、27.1±2.11%，DC處于未成熟狀態(tài)。2、初次MLR結果顯示，與負載供者抗原的未轉染的DC以及轉染空載體的DC(Adv-O

6、-DC)相比，Adv-IKK2dn-DC刺激受者T細胞增殖能力低下，差異有統計學意義(P＜0.05)。3、Adv-IKK2dn-DC在體外可以刺激Lewis大鼠T細胞誘導產生CD4+CD25-T細胞，Adv-IKK2dn-DC誘導產生的CD4+T細胞中低表達CD25（17.8＜0.89%），與對照組（72.8±1.99%）及轉染Adv-0組（63.3+1.70%）相比，差異均有統計學意義(P＜0.05)。收獲的CD4+CD25-T細胞經

7、流式細胞儀檢測純度達到94.2＜1.91%，經體外培養(yǎng)擴增后，細胞數量可達到2.0～2.5x106個/ml。4、CD4+CD25-T細胞組腎移植大鼠生存時間為(28.5±2.36)d，較其他各組顯著延長(P＜0.01）;與其他各組相比，CD4+CD25-T細胞組表達高水平IL-10和TGF-p(P＜0.05或P＜0.01);與排斥組、AdvO-CD4+T細胞組、第三方供者組相比，CD4+CD25-T細胞組低表達IL-2和IFN-γ(P＜