人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體對小鼠肝纖維化修復(fù)作用的研究.pdf

1、研究目的：
　　探討人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,hUCB-MSCs)來源的外泌體-exosome對四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化的修復(fù)作用，為臨床hUCB-MSCs來源的exosome移植治療肝纖維化提供理論基礎(chǔ)和實驗根據(jù)。
　　研究方法：
　　密度梯度離心法分離臍血單個核細(xì)胞

2、(human umbilical cord blood mononuclear cells,hUCB-MNCs)，根據(jù)間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)貼壁生長的生物學(xué)特性，經(jīng)過細(xì)胞換液及傳代，將未貼壁細(xì)胞去除。分別通過形態(tài)學(xué)，細(xì)胞表面標(biāo)志物鑒定貼壁細(xì)胞是否為正在分化的hUCB-MSCs。收集hUCB-MSCs無血清培養(yǎng)上清，超濾及蔗糖密度梯度離心法分離并純化exosome。透射電鏡下觀察其形態(tài)，流式

3、細(xì)胞術(shù)檢測其表面標(biāo)志的表達(dá)。腹腔注射CCl4構(gòu)建小鼠肝纖維化模型。造模8周后，隨機分為三組，分別經(jīng)小鼠尾靜脈注射hUCB-MSCs、exosome和生理鹽水。4周以后，處死全部小鼠，分別采集小鼠血清和肝組織，檢測肝功能AST、ALT和TBIL指標(biāo)，并對小鼠肝臟進(jìn)行 HE、Masson和天狼星紅染色，觀測其肝損傷和肝纖維化程度，綜合評價hUCB-MSCs來源的exosome對小鼠肝臟纖維化的修復(fù)效果。
　　研究結(jié)果：
　　在體

4、外成功的實現(xiàn)了hUCB-MSCs的培養(yǎng)與增殖。分離培養(yǎng)的細(xì)胞陽性表達(dá)CD166、CD44、CD105、CD29、CD73和 CD90，陰性表達(dá) CD34、CD45，提示貼壁細(xì)胞為hUCB-MSCs。hUCB-MSCs分泌的exosome，透射電鏡下均呈橢圓或碟狀，直徑介于40-100 nm之間，具有囊泡狀結(jié)構(gòu)。其表達(dá)共性標(biāo)志CD63、CD81及MSCs表面黏附分子CD90、CD73、D105、CD29和CD166。與生理鹽水組相比，hU

5、CB-MSCs及其來源的exosome移植可降低肝纖維化小鼠體內(nèi)AST、ALT和TBIL水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。病理染色顯示肝臟膠原沉積減少，炎癥癥狀減輕。
　　研究結(jié)論
　　1.密度梯度離心及貼壁培養(yǎng)法具有很強的操作性，可分離培養(yǎng)出hUCB-MSCs。hUCB-MSCs呈梭形的成纖維細(xì)胞樣形態(tài)，具有MSCs的生物學(xué)特性，可作為實驗所需要的種子細(xì)胞用于進(jìn)一步的研究。
　　2.采用超濾及蔗糖密度梯度離心法