酶轉(zhuǎn)化法制備人參皂苷C-K及其分離提取.pdf

1、人參是一種名貴的藥材,人參中的天然成分人參皂苷更是具有很高的藥學(xué)價(jià)值.本文主要研究的內(nèi)容是以人參二醇類皂苷(PPD)Rb1、Rb2、Rb3、Rd、Rc為底物,利用微生物酶法轉(zhuǎn)化生產(chǎn)人參稀有皂苷C-K,用硅膠柱分離提取人參皂苷C-K,并用高效液相色譜和核磁共振對(duì)其純度與結(jié)構(gòu)進(jìn)行確認(rèn).為了得到具有較高產(chǎn)對(duì)人參皂苷糖苷酶的菌株,我們選取了6種菌株,研究它們產(chǎn)生皂苷糖苷酶的能力.實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)菌株sp.848產(chǎn)皂苷糖苷酶的能力最強(qiáng).而在培養(yǎng)基的最適誘

2、導(dǎo)物及比例的篩選中,通過實(shí)驗(yàn)確定,以豆粕為誘導(dǎo)物[5°麥芽汁45ml+10％(W/V)豆粕15ml+40ml自來水]時(shí),sp.848產(chǎn)皂苷糖苷酶的能力最強(qiáng).此外,經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該菌株在28℃至30℃條件下發(fā)酵9天,該酶活性最好.為了提高皂苷糖苷酶對(duì)人參二醇類皂苷(PPD)轉(zhuǎn)化生成人參皂苷C-K的產(chǎn)率,本實(shí)驗(yàn)對(duì)酶反應(yīng)條件進(jìn)行了探索,確定了酶反應(yīng)的最佳底物濃度、反應(yīng)時(shí)間、pH值及反應(yīng)溫度.皂苷糖苷酶反應(yīng)的最佳底物濃度是0.5％,最佳反應(yīng)時(shí)間是2

3、4小時(shí),最佳pH值是5.0,酶最佳反應(yīng)溫度是40℃.依據(jù)最適的酶反應(yīng)條件擴(kuò)大酶反應(yīng).酶反應(yīng)產(chǎn)物用大孔樹脂AB-8和D-280進(jìn)行吸附、脫色、干燥處理,經(jīng)TLC法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)皂苷C-K的理論收率為67.6％.再將酶反應(yīng)產(chǎn)物用硅膠柱層層析法進(jìn)行分離純化,以氯仿和甲醇(V氯仿:V甲醇=9:1)的混合液為沈脫劑進(jìn)行洗脫.將收集的純品在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸干、稱重,確定其重量收率為33％.對(duì)所提純的人參皂苷C-K用高效液相色譜進(jìn)行純度檢測(cè),發(fā)現(xiàn)其純度在95