多殺菌素分離純化的工藝研究.pdf

1、綠色廣譜生物殺蟲劑多殺菌素是由放線菌刺糖多孢菌(Saccharopolysporaspinosa)發(fā)酵產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，它具有高效、低毒、低殘留和對環(huán)境友好等優(yōu)點。本課題主要目的就是運(yùn)用溶劑萃取法和樹脂吸附法從發(fā)酵液中提取多殺菌素，確定較為合理的工藝方法和參數(shù)以及分離純化工藝路線。 首先，本文建立了關(guān)于多殺菌素的快速定量分析檢測方法，包括薄層層析法和高效液相色譜法。其中建立的高效液相色譜法具有快速、準(zhǔn)確等特點，適用于測定發(fā)酵液

2、及各種分離過程中的多殺菌素的含量。其最佳色譜條件如下：色譜柱：碳十八烷基硅膠鍵合柱；流動相：甲醇：乙腈：水(含0.05％乙酸銨)=49：49：2；檢測波長：246nm；流速：1ml/min；進(jìn)樣量：10μl；柱溫：室溫。 在溶劑萃取法中，優(yōu)化后的條件為：發(fā)酵液調(diào)至pH9.0，加入等體積丙酮，浸提8h，離心后取上清液，經(jīng)減壓濃縮后，再以等體積的乙酸乙酯萃取三次，再次濃縮到1/3的原體積時，用0.2mol/L的酒石酸溶液反萃取，得到

3、的水相調(diào)pH為9.0時析出固體，真空干燥得到多殺菌素成品。 在樹脂吸附法研究中，篩選出非極性的XAD-4樹脂作為吸附劑，優(yōu)化后的吸附條件為：pH值為11；吸附流速為1/6(1/min)；加入2％氯化鈉(W/V)；吸附量可達(dá)1.09×104μg/ml濕樹脂。優(yōu)化后的洗脫條件：采用梯度洗脫的方式，以丙酮為洗脫劑，低濃度區(qū)內(nèi)(0～70％)大量雜質(zhì)及色素被洗脫；高濃度區(qū)(70％～95％)內(nèi)有效成分被洗脫，伴有少量雜質(zhì)和色素。 結(jié)