多殺菌素高產(chǎn)菌株的誘變育種和發(fā)酵工藝優(yōu)化.pdf

1、多殺菌素是由放線菌刺糖多孢菌發(fā)酵產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，主要由兩種具有顯著殺蟲活性的物質(zhì)Spinosad A和Spinosad D組成，屬大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。由于多殺菌素兼具生物農(nóng)藥的安全性和化學(xué)合成農(nóng)藥的速效性特點(diǎn)，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和糧食儲(chǔ)藏中具有良好的應(yīng)用價(jià)值和廣闊的市場(chǎng)前景。本文通過化學(xué)誘變選育獲得多殺菌素產(chǎn)量提高的菌株，并對(duì)其生長和代謝特性進(jìn)行研究，同時(shí)進(jìn)行了搖瓶發(fā)酵工藝優(yōu)化。主要結(jié)論如下：
　　 1、通過兩次NTG誘變，獲得遺傳穩(wěn)

2、定高產(chǎn)菌株1株，多殺菌素產(chǎn)量比出發(fā)菌株的多殺菌素產(chǎn)量最高提高了28％。
　　 2、通過考察10種固體培養(yǎng)基對(duì)刺糖多孢菌生長快慢、菌落形態(tài)大小和產(chǎn)孢豐富度的影響，確定了5種菌體生長迅速，產(chǎn)孢豐富的固體培養(yǎng)基。在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了4℃低溫保藏試驗(yàn)，確定了一種短時(shí)間內(nèi)不易引起菌株發(fā)生變異的固體培養(yǎng)基。配方為：酶解酪蛋白0.2％，Yeast extract0.3％，MgSO4·7H2O0.2％，葡萄糖1％，瓊脂2％。
　　 3、通過

3、對(duì)刺糖多孢菌的種子培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基裝量、搖床轉(zhuǎn)速和添加玻璃珠個(gè)數(shù)進(jìn)行研究，同時(shí)運(yùn)用Gompertz模型擬合其生長曲線，最終確定當(dāng)培養(yǎng)溫度為29℃，搖床轉(zhuǎn)速240 r/min、玻璃珠6個(gè)、培養(yǎng)基裝量30 mL/250 mL時(shí)，種子培養(yǎng)基可獲得最大生物量。
　　 4、考察了碳源對(duì)多殺菌素合成的影響，并通過響應(yīng)面試驗(yàn)確定了高產(chǎn)菌株N8-30-37的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖6.5％，可溶性淀粉8.5％，棉籽蛋白2.8％，蛋白胨2％