肌漿網(wǎng)鈣-ATP酶及線粒體ATP敏感性鉀通道介導(dǎo)的預(yù)適應(yīng)心肌保護(hù)作用.pdf

1、肌漿網(wǎng)鈣-ATP酶及線粒體ATP敏感性鉀通道介導(dǎo)的預(yù)適應(yīng)心肌保護(hù)作用 [目的及背景]：缺血預(yù)適應(yīng)(IPC)是一種抗心肌缺血再灌注損傷(I/R)的內(nèi)源性保護(hù)途徑。而近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)一些藥物可以誘導(dǎo)預(yù)適應(yīng)保護(hù)作用。預(yù)適應(yīng)的機(jī)制目前仍不完全清楚，許多研究表明延緩細(xì)胞內(nèi)鈣超載是IPC的共同途徑，而IPC則可通過(guò)影響肌漿網(wǎng)鈣-ATP酶(SERCA)功能參與延緩鈣超載的發(fā)生。而SERCA如何參與其中尚不清楚。線粒體ATP敏感性鉀通道(mit

2、oKATP)的開放目前被認(rèn)為是參與IPC的一個(gè)重要的因素。而有研究表明mitoKATP的開放影響了I/R胞內(nèi)鈣分布而發(fā)揮心肌保護(hù)作用的。本實(shí)驗(yàn)意在探討IPC和兩種藥物(腺苷及前胡丙素)誘導(dǎo)的早期預(yù)適應(yīng)對(duì)心肌的保護(hù)作用，并在此基礎(chǔ)上探討SERCA及mitoKATP在其中所起的作用，以及兩者之間的關(guān)系。 [方法]：①酶消化法培養(yǎng)新生SD大鼠原代心肌細(xì)胞②參照koyama等的方法制作體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞的缺氧/復(fù)氧損傷模型③臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢

3、測(cè)心肌細(xì)胞存活指數(shù)，全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)乳酸脫氫酶(LDH)的漏出量，以觀察早期預(yù)適應(yīng)對(duì)心肌細(xì)胞不同時(shí)間段缺氧(6h，10h，16h)/復(fù)氧2h損傷的保護(hù)作用及mitoKATP在其中的作用④采用改良的p-NPP法觀察預(yù)適應(yīng)對(duì)不同時(shí)間段缺氧(6h，10h，16h)/復(fù)氧2h時(shí)SERCA活性的影響及mitoKATP在其中的作用⑤半定量RT-PCR法檢測(cè)預(yù)適應(yīng)對(duì)缺氧10h/復(fù)氧2h時(shí)SERCA2a轉(zhuǎn)錄水平的影響及mitoKATP在其

4、中的作用。 [結(jié)果]：①原代培養(yǎng)結(jié)果顯示心肌細(xì)胞呈菱形，不規(guī)則形，搏動(dòng)頻率80-100次/分。②利用自制的缺氧盒，測(cè)得培養(yǎng)液中氧分壓均小于4.0Kpa，隨著缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)，缺氧/復(fù)氧組較正常培養(yǎng)組細(xì)胞損傷明顯逐漸增強(qiáng)。③6h缺氧2h復(fù)氧時(shí)各組間細(xì)胞損傷指標(biāo)無(wú)顯著差異；缺氧預(yù)適應(yīng)及前胡丙素預(yù)適應(yīng)組在10h及16h缺氧2h復(fù)氧后，均能表現(xiàn)出一定的抗心肌細(xì)胞損傷作用(p＜0.05)。腺苷預(yù)適應(yīng)只是在10h缺氧2h復(fù)氧時(shí)存在一定的保護(hù)作

5、用(p＜0.01)，對(duì)于更長(zhǎng)時(shí)間的缺氧，這一保護(hù)作用消失。給予5-HD后，缺氧預(yù)適應(yīng)組及前胡丙素預(yù)適應(yīng)組的保護(hù)作用減弱(p＜0.05)，但對(duì)腺苷預(yù)適應(yīng)無(wú)明顯影響。④6h缺氧2h復(fù)氧時(shí)各組間SERCA活性無(wú)顯著差異。10h及16h缺氧2h復(fù)氧后，缺氧/復(fù)氧組較正常培養(yǎng)組肌漿網(wǎng)鈣-ATP酶活性顯著下降(p＜0.01)。缺氧預(yù)適應(yīng)及前胡丙素預(yù)適應(yīng)則能緩解這種下降的趨勢(shì)(p＜0.05)。而在腺苷預(yù)適應(yīng)組未觀察到這種作用。給予5-HD后，缺氧預(yù)適

6、應(yīng)及前胡丙素預(yù)適應(yīng)的這種保護(hù)作用減弱(p＜0.05)。⑤缺氧/復(fù)氧組SERCA2a轉(zhuǎn)錄水平較正常培養(yǎng)組顯著下降(p＜0.01)。缺氧預(yù)適應(yīng)及前胡丙素預(yù)適應(yīng)則能逆轉(zhuǎn)缺氧/復(fù)氧對(duì)SERCA2a轉(zhuǎn)錄的抑制作用(p＜0.05)。而腺苷預(yù)適應(yīng)無(wú)此作用。而給予5-HD后，減弱了缺氧預(yù)適應(yīng)及前胡丙素預(yù)適應(yīng)的這種作用(p＜0.05)。 [結(jié)論]：①缺氧預(yù)適應(yīng)、腺苷預(yù)適應(yīng)及前胡丙素預(yù)適應(yīng)均能產(chǎn)生對(duì)缺氧/復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞的早期相保護(hù)作用。②mito