SRC-1和Twist1蛋白表達(dá)與人乳腺癌臨床預(yù)后的關(guān)系以及誘導(dǎo)性敲除Twist1基因?qū)π∈笊砉δ苡绊懙某醪窖芯?pdf

1、乳腺癌是世界上女性患病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一。盡管如ER，PR和HER2等一些分子標(biāo)記物已經(jīng)被廣泛用于對(duì)乳腺癌病理類型的分析、治療方案的選擇以及預(yù)后判斷的參考，但是，這些分子標(biāo)記物對(duì)判斷患者的質(zhì)量反應(yīng)及預(yù)后仍有相當(dāng)?shù)木窒扌?。所以，我們?nèi)孕枰l(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證更多可靠的分子標(biāo)記物，使之能夠應(yīng)用于臨床診治和預(yù)后判斷。
　　Twist1屬于堿性螺旋-環(huán)-螺旋(basichelix-loop-helix，bHLH)轉(zhuǎn)錄因子超家族成員，它編碼

2、一種含有堿性螺旋-環(huán)-螺旋(bHLH)結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子和氨基酸基序特異蛋白參與調(diào)節(jié)器官發(fā)生的過(guò)程。Twist1最初被發(fā)現(xiàn)在果蠅的胚胎中胚層分化中發(fā)揮關(guān)鍵作用。與其調(diào)節(jié)器官發(fā)生的主要作用一致的是，生理情況下，Twist1主要在中胚層來(lái)源的組織中的表達(dá)。作為一個(gè)胚胎形態(tài)發(fā)生的主要調(diào)節(jié)因子，Twist1也被認(rèn)為在腫瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、侵襲、轉(zhuǎn)移、癌細(xì)胞干性維持以及癌細(xì)胞化療耐藥等過(guò)程中起到非常重要的作用。Twist1在人乳腺癌中過(guò)表達(dá)往往與

3、腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及不良預(yù)后密切相關(guān)。因此Twist1被看做是乳腺癌治療的潛在靶標(biāo)。
　　第一部分:SRC-1與Twist1在人乳腺癌中的表達(dá)及與臨床預(yù)后的關(guān)系
　　類固醇受體輔助活化因子1(SRC-1或NCOA1)是p160家族成員之一，其作用是在性激素存在時(shí)輔助活化ERα和PR等核受體。之前的研究表明，SRC-1不僅在動(dòng)物生殖器官的發(fā)育和生長(zhǎng)過(guò)程中起到非常重要的作用，而且在腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的多種信號(hào)通路

4、中扮演著異常重要的角色。盡管基礎(chǔ)研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在乳腺癌細(xì)胞中，SRC-1通過(guò)共激活能結(jié)合于Twist1近端啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄因子PEA3來(lái)激活Twist1的轉(zhuǎn)錄，但在人乳腺癌中，SRC-1與Twist1的關(guān)系以及它們與各臨床因子的關(guān)系目前仍屬未知。
　　為了解在人乳腺癌中SRC-1與Twist1蛋白表達(dá)的關(guān)系，以及探索二者在乳腺癌患者臨床預(yù)后判斷中的價(jià)值，我們將對(duì)制作成組織芯片的137例乳腺癌患者的腫瘤組織進(jìn)行SRC-1和Twist1免疫

5、組化染色并評(píng)分，其中123例患者有中位時(shí)間長(zhǎng)達(dá)5年的術(shù)后隨訪資料。我們采用Kaplan-Meier法制作了生存曲線，并采用COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行單因素和多因素生存分析。
　　在本研究中，我們發(fā)現(xiàn):
　　1.在人乳腺癌中SRC-1和Twist1的蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(p=0.009)。
　　2.SRC-1的表達(dá)與HER2的呈正相關(guān)(P=0.024)。Twist1的表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(p＜0.001)，與PR陽(yáng)性表達(dá)呈

6、負(fù)相關(guān)(P=0.041)。
　　3.SRC-1或Twist1陽(yáng)性表達(dá)患者的總生存率(OS)和無(wú)病生存率(DFS)比均陰性表達(dá)的患者明顯較差(各組p＜0.05)。另外，SRC-1和Twist1同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)的患者在四組患者中預(yù)后最差，而SRC-1和Twist1同時(shí)陰性表達(dá)的患者預(yù)后最佳(各組p＜0.01)。
　　4.COX多因素生存分析發(fā)現(xiàn)，SRC-1的表達(dá)、腫瘤分期和PR狀態(tài)是總生存率的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子(p=0.019，＜0.00

7、1和0.020);Twist1的表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和PR狀態(tài)是無(wú)病生存率的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子(p=0.006，0.001和0.029)。
　　第二部分:Twist1蛋白在成體小鼠全身組織器官中的分布及誘導(dǎo)性敲除Twist1基因?qū)π∈笊砉δ艿挠绊?br>　　由于Twist1缺失會(huì)導(dǎo)致小鼠在胚胎時(shí)期致死亡，Twist1在成年動(dòng)物中的功能仍然未知。人類的Twist1等位基因突變是Saethre-Chotzen綜合征(Saethre-Cho

8、tzensyndrome，SCS，尖頭并指(趾)畸形綜合征Ⅲ型，一種常染色體顯性遺傳綜合征。臨床表現(xiàn)為短頭畸形、面部不對(duì)稱、額部發(fā)際低、眉異常、眼瞼下垂、瞼裂斜向下、眶距增寬、鼻縱隔偏曲、面中部凹陷、小耳、錯(cuò)頜、并指，以及其它發(fā)育缺陷）發(fā)生的原因。針對(duì)癌癥患者，如果靶向敲除Twist1后是否會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥？這是一個(gè)值得探討的問(wèn)題。
　　首先，我們發(fā)現(xiàn)，Twist1蛋白在成體小鼠的乳腺成纖維細(xì)胞以及皮膚毛囊毛乳頭細(xì)胞等一些組織器

9、官中表達(dá);隨后，我們建立了他莫西芬誘導(dǎo)性Twist1基因敲除小鼠模型以研究Twist1敲除對(duì)成體小鼠的影響。
　　我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn):
　　1.在鼠齡6周時(shí)敲除雌鼠的Twist1基因?qū)ζ淙橄僭谇啻浩?、懷孕期和哺乳期的發(fā)育及其在哺乳期的泌乳功能沒有明顯影響。
　　2.盡管Twist1蛋白在皮膚毛乳頭細(xì)胞中的表達(dá)并未隨毛發(fā)生長(zhǎng)周期而發(fā)生改變，我們?cè)谛∈蟪錾蟮?3天（此時(shí)毛囊已發(fā)育）時(shí)敲除Twist1基因，發(fā)現(xiàn)小鼠毛發(fā)的休止

10、期明顯縮短，生長(zhǎng)期明顯延長(zhǎng)，因而毛發(fā)生長(zhǎng)的速度明顯加快。
　　3.Twist1敲除小鼠的生長(zhǎng)發(fā)育以及生育功能正常。分別在雄鼠和雌鼠中敲除Twist1基因，對(duì)其體重、心率、肌肉和脂肪含量等指標(biāo)均沒有明顯影響，僅在雌鼠中發(fā)現(xiàn)Twist1基因敲除使其血壓有輕度下降，但對(duì)雄鼠血壓沒有影響。
　　綜上所述，我們首次發(fā)現(xiàn)，在人乳腺癌中SRC-1的表達(dá)與Twist1的表達(dá)具有正相關(guān)，驗(yàn)證了二者間存在調(diào)控關(guān)系;我們也驗(yàn)證了SRC-1和Twi