生草烏水提液心臟毒性體內(nèi)外試驗研究.pdf

1、草烏是烏頭類中藥的一種，為藥典收載的常用中藥。在我國已有2000多年的使用歷史，功效顯著，療效確切，長于祛風(fēng)除濕，兼具止痛麻醉、抗炎抑癌之功效。但該類藥物毒性極大，尤其具有很強的心臟毒性，中毒后極易因各型嚴(yán)重心律失常，導(dǎo)致循環(huán)系統(tǒng)衰竭，發(fā)生休克，甚至死亡。近年來，因生草烏誤服及炮制使用不當(dāng)使人中毒死亡的案例在中國香港及大陸地區(qū)屢見報道。經(jīng)廣泛查閱國內(nèi)外文獻，發(fā)現(xiàn)烏頭類中藥炮制品的毒性機制研究較少，體外研究罕見。本課題擬對經(jīng)高壓蒸煮法得到

2、的生草烏水提液進行乳鼠心肌細胞毒性作用研究及Beagle犬心血管系統(tǒng)的安全藥理研究，從體內(nèi)體外全面評價其心臟毒性并探討其作用機制。 體外細胞毒性試驗采用原代乳鼠心肌細胞培養(yǎng)的方法，設(shè)生草烏水提液10mg生藥/ml，2mg生藥/ml，0.4mg生藥/ml 3個試驗組，烏頭堿10ug/ml陽性對照組，PBS陰性對照組。在心肌細胞培養(yǎng)5d，細胞特征穩(wěn)定后，進行染毒，并在染毒24h及48h后觀察細胞形態(tài)及細胞特征改變，測定丙二醛(mal

3、ondialdehyde，MDA)含量，MTT法檢測細胞活性及流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡指數(shù)。結(jié)果顯示：生草烏水提液在染毒劑量達到10mg生藥/ml時，對乳鼠心肌細胞產(chǎn)生較強的細胞毒性損害，出現(xiàn)細胞形態(tài)改變、細胞搏動特征丟失、細胞活力下降、氧化損傷作用明顯、大量細胞凋亡；而2mg生藥/ml劑量組僅出現(xiàn)輕微毒性改變，0.4mg生藥/ml劑量組對心肌細胞基本無毒性損害。其毒性機制可能為：生草烏水提液中含有的烏頭堿及其類似物成分激活了細胞鈉離子通

4、道，阻斷了L型鈣離子通道活動，影響細胞電生理功能；同時還通過抑制心肌細胞膜的Na<'+>-K<'+>-ATP酶，以及細胞線粒體上的各種呼吸酶，引起心肌細胞能量代謝障礙，直接造成細胞氧化損傷。而心肌細胞“鈣超載”和有氧代謝障礙又進一步誘發(fā)細胞凋亡，加重細胞毒作用。 體內(nèi)試驗采用Beagle犬進行心血管系統(tǒng)的安全藥理研究，試驗設(shè)單個最大給藥劑量組，Beagle犬在麻醉狀態(tài)下經(jīng)口插入胃管給予生草烏水提液2.49g生藥/kg，分別于給藥

5、前及給藥后30，60，90，120，180，240min測定動物的收縮壓、舒張壓、平均動脈壓、心電圖標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)(心率、P、T、R波和QRS、PR、QT間期)。結(jié)果顯示：生草烏水提液給藥后，各時間點Beagle犬的血壓(收縮壓、舒張壓、平均動脈壓)、心率，P、T、R波和QRS、PR、Q-T間期等指標(biāo)與給藥前相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。綜合以上體內(nèi)和體外試驗結(jié)果，可以得出以下結(jié)論：在本實驗室條件下，生草烏水提液10mg生藥/ml