雙黃連肺部吸收特性及其肺部毒性的體內(nèi)外研究.pdf

1、臨床上，雙黃連制劑有口服、注射和肺部吸入等不同用藥途徑，其中雙黃連氣霧劑在治療肺炎、上呼吸道感染、支氣管炎等呼吸道疾病方面應(yīng)用較多，臨床研究報(bào)道多達(dá)上百篇。但值得關(guān)注的是，雙黃連霧化吸入劑并沒(méi)有得到SFDA批準(zhǔn)，且雙黃連注射劑的肺部吸收特性和肺部安全性研究尚未見(jiàn)研究報(bào)道。因此，本論文的研究目的是建立適合于體內(nèi)和體外評(píng)價(jià)雙黃連主要化學(xué)指標(biāo)成分的肺部吸收特性以及肺部毒性的方法，初步闡明這些成分的肺部吸收特性以及雙黃連在不同劑量下的潛在呼吸道

2、毒性。
　　 本論文第一部分建立了雙黃連大鼠血漿樣品的處理方法和同時(shí)測(cè)定血漿樣品中綠原酸、黃芩苷和連翹酯苷三個(gè)成分的HPLC-MS/MS的分析方法，該方法特異性、精確度、重現(xiàn)性、定量限和靈敏度均能較好地滿足血漿樣品中藥物含量測(cè)定要求。另外，應(yīng)用上述方法考察了雙黃連溶液經(jīng)大鼠靜脈注射，氣管噴霧給藥和灌胃給藥后的藥代動(dòng)力學(xué)特征。結(jié)果顯示，大鼠氣管噴霧給藥后可快速吸收，血藥中達(dá)峰時(shí)間小于10分鐘，相對(duì)于口服給藥有更高的生物利用度；綠原

3、酸、黃芩苷和連翹酯苷的肺部給藥和口服的絕對(duì)生物利用度分別為9.62±1.4、13.8±4.6、194.5±9.4μg/ml，min。
　　 第二部分建立了以Caco-2和Calu-3細(xì)胞株為模型的體外吸收機(jī)制評(píng)價(jià)方法，并應(yīng)用該方法評(píng)價(jià)了雙黃連中各成分的吸收規(guī)律。結(jié)果表明，綠原酸和黃芩苷在呼吸道和腸道的吸收均以被動(dòng)擴(kuò)散為主。比較而言，雙黃連中主要化學(xué)成分在肺部具有較好的通透性?？诜詹畹挠H水性黃酮類化合物，可以以霧滴或微粒的形式

4、通過(guò)肺部給藥達(dá)到較高呼吸道局部濃度，并可吸收進(jìn)入到全身循環(huán)。
　　 第三部分建立了以A549和Calu-3細(xì)胞株為模型的體外毒性以及肺泡灌洗結(jié)合病理切片的體內(nèi)毒性評(píng)價(jià)方法。體外毒性評(píng)價(jià)中通過(guò)MTT和LDH方法評(píng)價(jià)了雙黃連及主要化學(xué)成分的細(xì)胞毒性；另外雙黃連體內(nèi)外的潛在炎癥反應(yīng)通過(guò)ELISA法測(cè)定，灌洗液和細(xì)胞培養(yǎng)液中白介素-8等促炎癥細(xì)胞因子表達(dá)進(jìn)行評(píng)價(jià)。體外毒性評(píng)價(jià)顯示在臨床起始用藥濃度下，雙黃連顯示出了一定的細(xì)胞毒性，并且細(xì)

5、胞培養(yǎng)液中促炎癥細(xì)胞因子表達(dá)呈劑量相關(guān)的非顯著的上升趨勢(shì)；體內(nèi)研究結(jié)果表明雙黃連在低（50 mg/kg）、中（100 mg/kg）、高（200 mg/kg）三個(gè)劑量下無(wú)論是病理切片還是白介素-8表達(dá)方面均顯示出了顯著的毒性。
　　 綜上，本文研究結(jié)果表明，雖然雙黃連經(jīng)肺部給藥后呈現(xiàn)出較為理想的替代口服給藥的藥代動(dòng)力學(xué)特性，但初步安全性研究結(jié)果表明，雙黃連在較高劑量下可能存在潛在的肺部毒性，肺部吸入療法可能有必要明確適當(dāng)?shù)氖褂脛┝?/p>