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文檔簡介
1、目的:綠色熒光蛋白示蹤技術在大鼠骨髓間充質干細胞心臟移植中的應用研究;攜帶HGF基因骨髓間充質細胞移植治療大鼠心力衰竭的研究;G-CSF聯(lián)合攜帶HGF基因骨髓間充質干細胞治療大鼠心力衰竭的研究。 方法:從大鼠骨髓中分離骨髓間充質干細胞后進行培養(yǎng)和擴增,用攜帶GFP的腺病毒感染MSC,植入心肌梗死后的大鼠心臟梗死邊緣區(qū),觀察細胞移植后3天、7天、14天、21天、28天標記細胞存活、遷移和分布情況;通過結扎左冠狀動脈的方法建立大鼠心
2、肌梗死模型。4周后根據(jù)心臟超聲檢查結果,將FS≤30%的大鼠隨機分為4組,觀察時程為4周:①對照組(n=6):心梗邊緣注射生理鹽水;②MSC組(n=6):心梗邊緣注射GFP-Ad感染的MSCs;⑨HGF組(n=6):心梗邊緣注射HGF-Ad感染的MSCs:④HGF+CsA組(n=6):心梗邊緣注射HGF-Ad感染的MSCs,并于細胞移植次日腹腔內注射環(huán)孢A25mg/kg.d 14天。所有動物腹腔注射BrdU標記新生細胞。心肌梗死8周后,
3、行心臟超聲和血流動力學檢查檢測心功能,將動物處死取材。Western-Blot方法檢測HGF在心肌內的表達。用HE染色,免疫熒光染色,TUNEL等方法評價各種干預對心臟形態(tài),血管生成和內皮細胞增殖情況的影響,檢測心肌內凋亡相關的蛋白表達,探討HGF的作用機制。 結果:骨髓間充質干細胞在體內、體外均可成功能表達GFP。攜帶GFP的腺病毒感染MSC的感染效率達到98%,并且基本沒有毒性作用。激光共聚焦顯微鏡可觀察到GFP可成功示蹤移
4、植的MSCs 28天;攜帶HGF的骨髓間充質細胞可以在體內成功表達HGF蛋白。心肌梗死8周后,MSC組與對照組相比,LVEDP(9.76±0.54 vs 10.09±0.68kPa)、LVSP(15.98±0.81 vs 15.08±0.88 kPa)、dp/dtmax(362.15±14.00 vs347.34±19.16 kPa/s)和FS(23.83±2.37 vs 21.33±1.76%)幾項指標差別無統(tǒng)計學意義(p>0.05)
5、;HGF組與MSC組相比,LVEDP(7.65±0.52 vs 9.76±0.54 kPa)、(19.76±0.73 vs. 15.98±0.81 kPa)、dp/dtmax(503.48±16.97 vs. 362.15±14.00 kPa/s)和FS(29.63±2.88 vs. 23.83±2.37%)幾項指標差別均有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。HGF組的LVEDP顯著降低、Lvs.P和dp/dtmax升高和FS顯著增加。
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