西妥昔單抗治療晚期胃腸腫瘤療效及耐藥研究.pdf

1、西妥昔單抗是一種人鼠嵌合型抗表皮生長因子受體（EGFR）單克隆抗體，可與腫瘤細(xì)胞表面的EGFR結(jié)合，阻斷其下游信號傳導(dǎo)通路，抑制腫瘤細(xì)胞生長、浸潤、轉(zhuǎn)移等惡性表型。盡管西妥昔單抗在晚期結(jié)直腸腫瘤的一線、二線與三線治療中均顯示了較好療效，但對部分患者療效欠佳。已有研究發(fā)現(xiàn)這種原發(fā)性耐藥現(xiàn)象與腫瘤K-ras基因突變有關(guān)。 本研究觀察了西妥昔單抗聯(lián)合化療治療35例晚期胃腸腫瘤的臨床療效，并通過體內(nèi)外實驗研究，探討了K-ras基因突變

2、后，EGFR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中相關(guān)接頭蛋白表達的變化，以闡明西妥昔單抗耐藥的可能分子機制。材料與方法入選35例晚期胃腸腫瘤患者，分別接受以西妥昔單抗為基礎(chǔ)的靶向治療聯(lián)合化學(xué)治療，用RECIST標(biāo)準(zhǔn)評價臨床療效，用NCI–CTCv3.0標(biāo)準(zhǔn)評價治療安全性。收集部分患者原發(fā)灶組織，檢測其K-ras突變狀態(tài)。通過基因測序及免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法，篩選EGFR 表達陽性、同時K-ras基因呈突變型或野生型的結(jié)腸癌細(xì)胞各一株，應(yīng)用細(xì)胞增殖實驗、流式細(xì)胞

3、技術(shù)檢測西妥昔單抗在體外對結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞毒作用和對細(xì)胞凋亡的影響。用K-ras呈野生型和突變型的結(jié)腸癌細(xì)胞株，分別建立裸鼠皮下移植瘤模型，給予西妥昔單抗治療，繪制腫瘤生長曲線，用TDT 介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記技術(shù)（TUNEL）檢測細(xì)胞凋亡，用定量PCR、免疫組織化學(xué)染色、蛋白印跡等技術(shù)檢測移植瘤標(biāo)本中EGFR蛋白表達，以及EGFR 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中AKT 及其磷酸化蛋白的表達。結(jié)果共計入組35例胃腸腫瘤患者，接受西妥昔單抗為基礎(chǔ)的靶向治療聯(lián)

4、合化學(xué)治療后，1例獲完全緩解（CR）、14例部分緩解（PR）、14例疾病穩(wěn)定（SD）、6例疾病進展（PD）。對21例胃癌的疾病控制率（CR+PR+SD）為80.0％（16/20），14例腸癌的疾病控制率為86.7％（13/15）。同時檢測了其中11例患者的原發(fā)病灶，均為K-ras 野生型。西妥昔單抗對體外培養(yǎng)的結(jié)腸癌細(xì)胞未能顯示細(xì)胞毒作用。體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)，西妥昔單抗能明顯抑制K-ras 野生型結(jié)腸癌裸鼠皮下移植瘤生長，但對K-ras突變型

5、者抑制作用較差。對K-ras突變型結(jié)腸癌裸鼠皮下移植瘤，定量PCR檢測結(jié)果顯示，西妥昔單抗治療組AKT基因表達高于對照組。IHC及Western-blot顯示，西妥昔治療組與對照組的EGFR 及AKT蛋白表達無明顯差異，但西妥昔治療組的p-AKT表達高于對照組。結(jié)論西妥昔單抗聯(lián)合化療，對晚期胃腸腫瘤可獲較滿意的臨床控制率，但對部分患者未顯示明顯療效。體內(nèi)外實驗研究結(jié)果提示，K-ras突變狀態(tài)與西妥昔單抗療效相關(guān)，K-ras突變型者，EG