中草藥提取物的抑菌機(jī)理及對(duì)大腸桿菌的耐藥性研究.pdf

1、目的：
　　本試驗(yàn)旨在對(duì)課題組前期研制的替代飼用抗生素的中草藥提取物對(duì)致病菌的抑菌作用機(jī)制進(jìn)行初步探討，并研究大腸桿菌對(duì)中草藥提取物的耐藥性以及該提取物對(duì)抗生素耐藥大腸桿菌的逆轉(zhuǎn)作用，為中草藥提取物應(yīng)用于替代飼用抗生素提供較完善的理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.中草藥提取物抑菌機(jī)理研究。采用牛津杯法對(duì)大腸桿菌、腸炎沙門氏菌和金黃色葡萄球菌進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)，以抑菌圈直徑作為評(píng)價(jià)指標(biāo);采用試管稀釋法測(cè)定中草藥提取物對(duì)致病菌

2、的最低抑菌濃度(MIC)，二者共同評(píng)價(jià)致病菌對(duì)中草藥提取物和抗生素的敏感性，并用抗生素作為試驗(yàn)對(duì)照。
　　從細(xì)胞膜、細(xì)胞壁的完整性和蛋白含量幾方面研究抑菌機(jī)制。用濃度為1/2倍、1倍和2倍MIC的中草提取物處理菌體，通過測(cè)定細(xì)菌培養(yǎng)液中堿性磷酸酶活性以評(píng)價(jià)中草藥提取物對(duì)細(xì)菌細(xì)胞壁的影響;采用分光光度法和鈣試劑盒測(cè)定菌體胞內(nèi)鈣離子、核酸、離子的外泄量;用蛋白試劑盒測(cè)定菌體胞內(nèi)蛋白的外泄量，并與不添加藥物組比較。
　　2.大腸桿

3、菌對(duì)中草藥提取物的耐藥性研究。在低藥物濃度下連續(xù)傳代培養(yǎng)大腸桿菌，通過牛津杯法和試管稀釋法評(píng)價(jià)經(jīng)傳代培養(yǎng)的大腸桿菌對(duì)中草藥提取物和抗生素的敏感性，以觀察大腸桿菌對(duì)中草藥提取物和抗生素是否產(chǎn)生耐藥性。
　　3.中草藥提取物對(duì)大腸桿菌抗生素耐受性的逆轉(zhuǎn)作用研究。在低藥物濃度下連續(xù)傳代培養(yǎng)耐受抗生素的大腸桿菌，以抑菌圈直徑大小和最低抑菌濃度為指標(biāo)，判斷耐藥菌的耐藥性是否發(fā)生逆轉(zhuǎn)。
　　結(jié)果:
　　1.中草藥提取物抑菌機(jī)理研究

4、。體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，三種中草藥提取物對(duì)致病菌均有一定的抑制作用，其中烏梅提取物的抑菌作用更為突出。
　　對(duì)三種中草藥抑菌機(jī)制進(jìn)行初步探索，發(fā)現(xiàn)經(jīng)中草藥提取物處理過的菌體，細(xì)菌培養(yǎng)液電導(dǎo)率、大分子物質(zhì)含量、鈣離子濃度、堿性磷酸酶含量以及可溶性蛋白含量均有所上升，菌體受破壞的程度與中草藥濃度呈現(xiàn)正相關(guān)，說明中草藥提取物的抑菌機(jī)理是通過破壞細(xì)菌細(xì)胞膜、壁的完整性、影響蛋白含量而起作用，并且復(fù)方烏梅提取物主要是影響了細(xì)胞膜的通透性，而

5、五倍子提取物的則是通過影響可溶性蛋白含量和細(xì)胞壁的完整性來起作用，烏梅提取物的作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。
　　2.大腸桿菌對(duì)中草藥提取物的耐藥性研究。耐藥性試驗(yàn)結(jié)果表明，大腸桿菌在低濃度的含藥培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)，傳代菌對(duì)抗生素會(huì)產(chǎn)生的耐受性，但對(duì)中草藥提取物基本不產(chǎn)生耐藥性。
　　3.中草藥提取物對(duì)大腸桿菌抗生素耐受性的逆轉(zhuǎn)作用研究。中草藥提取物對(duì)耐藥大腸桿菌的逆轉(zhuǎn)試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)烏梅、五倍子、復(fù)方烏梅這三種中草藥提取物雖可部分降