不同源大腸桿菌耐藥性及整合子-基因盒研究.pdf

1、抗菌藥物在醫(yī)學(xué)臨床、養(yǎng)殖業(yè)等領(lǐng)域大量使用，使細(xì)菌的耐藥性不斷增加，多重耐藥現(xiàn)象越來越嚴(yán)重，這給我們敲響了警鐘，耐藥性問題引起了各國的重視。大腸桿菌作為腸道重要的棲居菌之一，承受著不同藥物的誘導(dǎo)和選擇壓力，導(dǎo)致大腸桿菌耐藥性十分嚴(yán)重，使其也成為耐藥基因儲(chǔ)庫和交換的重要場(chǎng)所。
　　本次研究從不同地區(qū)采集食品動(dòng)物（豬，牛，雞）、寵物犬、大熊貓糞樣以及大熊貓生活環(huán)境樣本中分離、純化和鑒定出588株大腸桿菌。依據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(

2、CLSI)推薦的紙片法及結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)所有分離的大腸桿菌菌株檢測(cè)其對(duì)13種抗菌藥物的耐藥性。結(jié)果顯示，588株大腸桿菌對(duì)13種抗菌藥物呈不同水平的耐藥性（耐藥率在7.48～80.44％），其中對(duì)氨芐西林、四環(huán)素、氟苯尼考和復(fù)方新諾明呈很高耐藥性（耐藥率超過70％），而對(duì)左氧氟沙星，阿米卡星，頭孢噻肟則呈較低耐藥性（耐藥率低于14％）。93.5％的菌株呈多重耐藥性，多重耐藥菌株主要為5～11耐。不同來源菌株耐藥性比較發(fā)現(xiàn)，寵物犬源大腸桿

3、菌對(duì)環(huán)丙沙星、氨芐西林、頭孢噻肟和阿米卡星的耐藥率極顯著高于其他源菌株(P＜0.01);食品動(dòng)物源菌株對(duì)氟苯尼考，鏈霉素，諾氟沙星，四環(huán)素、頭孢曲松和氨曲南藥物耐藥率高于其他來源菌株，尤其對(duì)氟苯尼考，頭孢曲松，氨曲南和復(fù)方新諾明的耐藥率與其他源菌株有極顯著差異性(P＜0.01);大熊貓糞源和環(huán)境源菌株對(duì)多數(shù)藥物呈較低水平耐藥（耐藥率低于20.7％）。
　　從588株大腸桿菌中隨機(jī)選取320株，通過PCR法擴(kuò)增其整合酶1型、2型和3

4、型基因。結(jié)果顯示，食品動(dòng)物源菌株1類整合子檢出率最高為69.70％（138株/198株），其中，豬源、雞源和牛源分別為76.92％、71.79％和58.18％;犬源檢出率為64.10％;大熊貓?jiān)春铜h(huán)境源檢出率分別為50.75％和31.25％。2類整合子檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，2株豬源菌和2株雞源菌同時(shí)檢測(cè)出1型整合子和2型整合子;未檢測(cè)出3類整合子。
　　隨機(jī)抽取145株1類整合子陽性菌，對(duì)其基因盒可變區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測(cè)序，結(jié)果顯示:食品動(dòng)物

5、源、犬源、大熊貓糞源及環(huán)境源菌株基因盒檢出率分別為91.36％、88.0％、58.82％和80.0％，檢出的基因盒共有7種，基因盒基因排列分別為dfrA27、dfrA17、aadA2、dfrA1-orfC、dfrA27-aadA2、aacA4-aadA1-cat2和dfrA12-orfF-aadA2。對(duì)4株2類整合子陽性菌株基因盒可變區(qū)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，有2種不同類型的基因盒，分別為dfrA1-sat2-aadA1（1株）和dfrA1-sat2

6、（3株）。
　　本次對(duì)食品動(dòng)物源、犬源、大熊貓糞源和環(huán)境源大腸桿菌耐藥性及整合子-基因盒研究發(fā)現(xiàn)，不同源大腸桿菌對(duì)13種抗菌藥物呈不同水平的耐藥性，耐藥性與菌株來源有關(guān)，其中犬源菌株耐藥性最嚴(yán)重，其次是食品動(dòng)物源，大熊貓糞源及其生活環(huán)境源菌株耐藥性較低，耐藥菌株呈多重耐藥性;耐藥菌株中廣泛攜帶1類整合子，整合子-基因盒分子特征以介導(dǎo)氨基糖苷類和磺胺-甲氧芐啶類耐藥的aadA和dfr基因類型為主;菌株的耐藥表型與其所攜帶的基因盒有一