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1、抗菌藥物在醫(yī)學(xué)臨床、養(yǎng)殖業(yè)等領(lǐng)域大量使用,使細(xì)菌的耐藥性不斷增加,多重耐藥現(xiàn)象越來越嚴(yán)重,這給我們敲響了警鐘,耐藥性問題引起了各國的重視。大腸桿菌作為腸道重要的棲居菌之一,承受著不同藥物的誘導(dǎo)和選擇壓力,導(dǎo)致大腸桿菌耐藥性十分嚴(yán)重,使其也成為耐藥基因儲(chǔ)庫和交換的重要場(chǎng)所。
本次研究從不同地區(qū)采集食品動(dòng)物(豬,牛,雞)、寵物犬、大熊貓糞樣以及大熊貓生活環(huán)境樣本中分離、純化和鑒定出588株大腸桿菌。依據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(
2、CLSI)推薦的紙片法及結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn),對(duì)所有分離的大腸桿菌菌株檢測(cè)其對(duì)13種抗菌藥物的耐藥性。結(jié)果顯示,588株大腸桿菌對(duì)13種抗菌藥物呈不同水平的耐藥性(耐藥率在7.48~80.44%),其中對(duì)氨芐西林、四環(huán)素、氟苯尼考和復(fù)方新諾明呈很高耐藥性(耐藥率超過70%),而對(duì)左氧氟沙星,阿米卡星,頭孢噻肟則呈較低耐藥性(耐藥率低于14%)。93.5%的菌株呈多重耐藥性,多重耐藥菌株主要為5~11耐。不同來源菌株耐藥性比較發(fā)現(xiàn),寵物犬源大腸桿
3、菌對(duì)環(huán)丙沙星、氨芐西林、頭孢噻肟和阿米卡星的耐藥率極顯著高于其他源菌株(P<0.01);食品動(dòng)物源菌株對(duì)氟苯尼考,鏈霉素,諾氟沙星,四環(huán)素、頭孢曲松和氨曲南藥物耐藥率高于其他來源菌株,尤其對(duì)氟苯尼考,頭孢曲松,氨曲南和復(fù)方新諾明的耐藥率與其他源菌株有極顯著差異性(P<0.01);大熊貓糞源和環(huán)境源菌株對(duì)多數(shù)藥物呈較低水平耐藥(耐藥率低于20.7%)。
從588株大腸桿菌中隨機(jī)選取320株,通過PCR法擴(kuò)增其整合酶1型、2型和3
4、型基因。結(jié)果顯示,食品動(dòng)物源菌株1類整合子檢出率最高為69.70%(138株/198株),其中,豬源、雞源和牛源分別為76.92%、71.79%和58.18%;犬源檢出率為64.10%;大熊貓?jiān)春铜h(huán)境源檢出率分別為50.75%和31.25%。2類整合子檢測(cè)發(fā)現(xiàn),2株豬源菌和2株雞源菌同時(shí)檢測(cè)出1型整合子和2型整合子;未檢測(cè)出3類整合子。
隨機(jī)抽取145株1類整合子陽性菌,對(duì)其基因盒可變區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測(cè)序,結(jié)果顯示:食品動(dòng)物
5、源、犬源、大熊貓糞源及環(huán)境源菌株基因盒檢出率分別為91.36%、88.0%、58.82%和80.0%,檢出的基因盒共有7種,基因盒基因排列分別為dfrA27、dfrA17、aadA2、dfrA1-orfC、dfrA27-aadA2、aacA4-aadA1-cat2和dfrA12-orfF-aadA2。對(duì)4株2類整合子陽性菌株基因盒可變區(qū)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),有2種不同類型的基因盒,分別為dfrA1-sat2-aadA1(1株)和dfrA1-sat2
6、(3株)。
本次對(duì)食品動(dòng)物源、犬源、大熊貓糞源和環(huán)境源大腸桿菌耐藥性及整合子-基因盒研究發(fā)現(xiàn),不同源大腸桿菌對(duì)13種抗菌藥物呈不同水平的耐藥性,耐藥性與菌株來源有關(guān),其中犬源菌株耐藥性最嚴(yán)重,其次是食品動(dòng)物源,大熊貓糞源及其生活環(huán)境源菌株耐藥性較低,耐藥菌株呈多重耐藥性;耐藥菌株中廣泛攜帶1類整合子,整合子-基因盒分子特征以介導(dǎo)氨基糖苷類和磺胺-甲氧芐啶類耐藥的aadA和dfr基因類型為主;菌株的耐藥表型與其所攜帶的基因盒有一
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