NEDD4-1對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡及遷移的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:檢測NEDD4-1(Neural precursor cells expressed developmentallydown-regulated4-1)在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá);研究NEDD4-1對膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡、遷移能力的影響;并探討NEDD4-1調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡及遷移的作用機(jī)制。
　　 方法:(1)應(yīng)用免疫印跡方法檢測正常腦組織及不同病理級別膠質(zhì)瘤標(biāo)本中NEDD4-1和CNrasGEF(Cyclic nucleotide

2、ras GEF)的表達(dá)情況。(2)采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法在U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞中過表達(dá)NEDD4-1或用siRNA下調(diào)NEDD4-1的表達(dá),用流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞的凋亡情況;用Transwell實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞的遷移情況。(3)在U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染PTEN與NEDD4-1或NEDD4-1 siRNA后,用流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞的凋亡情況。(4)在U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞中過表達(dá)NEDD4-1或用siRNA下調(diào)NEDD4-1的表達(dá)后,應(yīng)用RT-PCR

3、技術(shù)和免疫印跡技術(shù)分別檢測CNrasGEF的mRNA和蛋白的水平,探討NEDD4-1對CNrasGEF的調(diào)節(jié)作用。
　　 結(jié)果:(1)腦膠質(zhì)瘤組織NEDD4-1的水平較正常腦組織高,并隨腫瘤級別的增高而增高。(2)U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞中過表達(dá)NEDD4-1或用siRNA下調(diào)NEDD4-1的表達(dá)后,細(xì)胞凋亡未見有明顯的改變(P＞0.05);NEDD4-1過表達(dá)后細(xì)胞的遷移能力增強(qiáng),而RNAi干擾后細(xì)胞的遷移能力明顯降低(P＜0.05

4、)。(3)共轉(zhuǎn)染PTEN與NEDD4-1后細(xì)胞凋亡明顯增加;而共轉(zhuǎn)染PTEN與NEDD4-1 siRNA后,細(xì)胞凋亡明顯降低(P＜0.05)。(4)過表達(dá)NEDD4-1后CNrasGEF的mRNA水平無明顯變化,蛋白水平較對照組降低;用siRNA下調(diào)NEDD4-1的表達(dá)則產(chǎn)生相反的變化。(5)腦膠質(zhì)瘤組織CNrasGEF的水平較正常腦組織低,并隨腫瘤級別的增高而降低,與NEDD4-1的水平呈相反的變化。
　　 結(jié)論:(1)在膠質(zhì)