HIF-1α介導(dǎo)GGT對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和侵襲作用的研究.pdf

1、目的：研究Geranylgeranyltransferase(GGT)對(duì)腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞遷移和侵襲的影響，并探討其作用機(jī)制，為膠質(zhì)瘤的基因治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：1.分別應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞遷移和侵襲能力。2.明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中MMP-2活性表達(dá)。3.Western Blot檢測低氧條件培養(yǎng)0，6h，12h，24h，48h后腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中H

2、IF-1α蛋白表達(dá)。4.設(shè)計(jì)并合成針對(duì)人HIF-1α基因和GGTβ基因的siRNA oligo，通過WB檢測干擾效果，并檢測GGTβ同源家族FTα和FTβ蛋白表達(dá)來驗(yàn)證GGTβsiRNA的特異性。5.采用GGT-298抑制GGTβ活性或用siRNA下調(diào)GGTβ表達(dá)后，WB檢測HIF-1α蛋白表達(dá)情況；并用siRNA下調(diào)HIF-1α表達(dá)后，檢測GGTβ蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.低氧培養(yǎng)6h，12h，24h，48h后人腦膠質(zhì)瘤U2

3、51細(xì)胞中HIF-1α蛋白表達(dá)較常氧條件下增多，提示低氧模型構(gòu)建成功。2.與常氧條件相比，低氧促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的遷移和侵襲，且上調(diào)MMP-2的活性。3.與陰性對(duì)照相比，用siRNA下調(diào)HIF-1α和GGTβ的表達(dá)均可抑制人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞遷移、侵襲和MMP-2的活性。4.應(yīng)用siRNA下調(diào)GGTβ后，F(xiàn)Tα和FTβ蛋白表達(dá)均無變化，提示構(gòu)建的GGTβ siRNA具有特異性。5.應(yīng)用GGT-298抑制GGT活性或用siRNA下