芪蛭皺肺顆粒對慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺組織微血管新生的影響.pdf

1、目的:通過觀察芪蛭皺肺顆粒對慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)蛋白表達(dá)和轉(zhuǎn)錄水平及微血管密度(MVD)的影響,初步探討芪蛭皺肺顆粒對 COPD大鼠模型的治療作用及其對微血管新生的影響機(jī)制。
　　方法:將60只 SPF級 Wistar大鼠隨機(jī)分為6組:空白組、模型組、陽性對照組、芪蛭皺肺顆粒高、中、低劑量組,每組10只。采用香煙煙熏加氣管內(nèi)滴注脂多糖(LPS)的復(fù)合因素造模法建立 CO

2、PD大鼠模型。實(shí)驗(yàn)第15天起空白組、COPD模型組給予生理鹽水灌胃,陽性對照組給予羅氟司特溶液灌胃,芪蛭皺肺顆粒高、中、低劑量組分別給予不同濃度混懸液進(jìn)行灌胃,干預(yù)治療滿4周,于第43天處死大鼠,采集標(biāo)本。分別以 HE染色,MASSON染色、透射電鏡觀察肺組織病理形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)變化,免疫組化 SABC法檢測大鼠肺組織 VEGF及 MVD的表達(dá),用 RT-PCR法檢測 VEGF轉(zhuǎn)錄水平,用免疫熒光染色法檢測大鼠肺組織中 SP-A的表達(dá)。

3、
　　結(jié)果:
　　1.肺組織病理形態(tài)學(xué)的影響:HE染色模型組可見肺組織部分區(qū)域肺泡高度擴(kuò)張,肺泡間隔狹窄、斷裂,肺泡壁毛細(xì)血管受壓閉合,呈重度的肺氣腫表現(xiàn);細(xì)支氣管痙攣收縮,管腔狹窄;間質(zhì)小血管管壁增厚、硬化;細(xì)支氣管管壁、血管周圍及間質(zhì)見大量淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞灶狀浸潤。陽性對照組可減輕炎性細(xì)胞浸潤,但效果不明顯。芪蛭皺肺顆粒高劑量組可明顯減輕炎癥細(xì)胞浸潤,抑制小血管管壁增厚,明顯改善細(xì)支氣管管腔狹窄。Masson染色可見模

4、型組肺泡間質(zhì)、小支氣管、細(xì)小支氣管及其周圍膠原纖維沉積較空白組明顯增多;芪蛭皺肺顆粒各治療組則可明顯抑制肺泡間質(zhì)、小支氣管膠原纖維的增加。透射電鏡可見模型組胞質(zhì)內(nèi)線粒體腫脹,線粒體嵴斷裂或消失,板層體明顯減少并伴有局灶性溶解,質(zhì)膜邊緣絨毛樣突起明顯減少。與模型組比較,芪蛭皺肺顆粒高劑量組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)相對完整,線粒體腫脹不明顯,板層體空泡化減少,微絨毛數(shù)量明顯增多。
　　2.MVD:與空白組比較,模型組MVD顯著升高,差異有

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與模型組相比較,陽性對照組MVD降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。芪蛭皺肺顆粒高劑量組與模型組相比較MVD顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3.VEGF:免疫組化染色可見模型組大鼠肺組織VEGF表達(dá)較空白組明顯增強(qiáng),有顯著性差異(P<0.01);陽性對照組VEGF表達(dá)水平在模型組與中藥治療組之間,與模型組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);芪蛭皺肺顆粒高劑量組與模型組比較VEGF表達(dá)

6、水平明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與空白組比較,模型組大鼠肺組織VEGFmRNA的表達(dá)增強(qiáng),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,芪蛭皺肺顆粒高、中劑量組 VEGFmRNA的表達(dá)減少,差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　4.SP-A:與空白組比較,模型組大鼠肺組織 SP-A熒光表達(dá)及 SP-A平均肺泡陽性細(xì)胞數(shù)明顯降低,有顯著性差異(P<0.01);與模型組比較,陽性對照組 SP-A平均肺泡陽性細(xì)胞

7、數(shù)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與模型組比較,芪蛭皺肺顆粒高、中劑量組 SP-A熒光表達(dá)增強(qiáng),SP-A平均肺泡陽性細(xì)胞數(shù)明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　結(jié)論:
　　1、本實(shí)驗(yàn)采用煙熏加氣管內(nèi)滴注脂多糖成功建立了具有微血管新生現(xiàn)象的COPD大鼠模型。
　　2、大鼠COPD發(fā)病過程中微血管新生促進(jìn)因子VEGF的表達(dá)上調(diào),肺組織微血管新生活躍,說明微血管新生可能是COPD發(fā)病過程中一個(gè)重要環(huán)節(jié),抑