雙環(huán)己酮草酰二腙誘導的脫髓鞘模型的特點及大麻素WIN55,212-2對其髓鞘修復作用的研究.pdf

1、背景:
　　多發(fā)性硬化(MS)是一種多發(fā)于年輕人的慢性炎性脫髓鞘疾病,嚴重影響人們的生命健康。目前,該疾病還沒有完整的治療措施,因此人們對該疾病的治療研究付出了巨大地努力,例如通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)或者抗炎治療,或者通過降低少突膠質細胞的死亡數(shù)量來保護軸突,防止軸突損傷等。目前的研究發(fā)現(xiàn)大麻素對MS的疾病有很好的治療效果,應用非選擇性大麻素受體激動劑比單獨應用選擇性CB1或CB2受體激動劑對實驗性自免性腦脊髓炎(EAE)模型能發(fā)揮更好的

2、治療效果;大麻素WIN55,212-2為一種人工合成的大麻素,近期的研究發(fā)現(xiàn)其能夠很好的緩解EAE模型的癥狀,治療效果主要是通過其發(fā)揮調(diào)節(jié)免疫應答和抗炎作用來實現(xiàn)的,進而能夠促進少突膠質細胞以及少突膠質細胞前體細胞的存活,增加olig-2的表達。但大麻素在非免疫調(diào)節(jié)途徑下對MS的治療效果卻是未知,因此我們通過利用受免疫調(diào)節(jié)影響較小的Cuprizone(CPZ)誘導的脫髓鞘模型來觀察大麻素WIN55,212-2在非免疫環(huán)境下對MS的治療效

3、果,為大麻素對脫髓鞘疾病的治療機制提供新的補充
　　目的:
　　本實驗通過體重和行為學檢測對CPZ模型小鼠的整體狀態(tài)進行分析,然后主要對該模型的髓鞘脫失進行研究,利用LFB、MBP等形態(tài)學手段檢測CPZ模型小鼠髓鞘的變化以及注射大麻素WIN55,212-2后的治療效果,同時通過GFAP免疫組化染色觀察星形膠質細胞的變化,以探討大麻素WIN55,212-2對膠質瘢痕的影響。
　　方法:
　　取6周齡C57BL/6雄

4、性小鼠,體重在15-16g之間,按不同實驗目的分為模型實驗研究部分和藥物注射實驗研究部分。①模型實驗研究部分:分為正常組、CPZ模型組,正常組3只,CPZ模型組15只,共18只。正常組每天喂養(yǎng)普通飼料,CPZ模型組每天喂養(yǎng)含有0.25％CPZ的混合飼料;CPZ模型鼠從喂養(yǎng)鼠糧開始每隔一天進行體重和行為學(旋轉棒,曠場試驗)檢測,從第1周末開始,每周3只灌注取材,連續(xù)5周,第5周末結束(CPZ1周組,CPZ2周組,CPZ3周組,CPZ4周

5、組,CPZ5周組),利用LFB染色觀察胼胝體區(qū)域髓鞘變化,利用GFAP免疫組化染色觀察星形膠質細胞。②藥物注射實驗研究部分:分為正常組、第2周WIN55,212-2給藥組與DMSO對照組、第4周WIN55,212-2給藥組及相應DMSO對照組,每組10只,共50只。正常組每天喂養(yǎng)普通飼料,給藥組每天喂養(yǎng)含有0.25%CPZ的混合飼料,在第2周初和第4周初進行WIN55,212-2注射,DMSO(二甲基亞砜,WIN55,212-2溶劑)對

6、照組則在相同條件下注射10%DMSO:生理鹽水1:1的混合液,繼續(xù)喂養(yǎng)CPZ混合飼料,于第3、5周末通過體質量變化觀察整體狀態(tài);旋轉棒實驗觀察小鼠運動功能,利用LFB和MBP染色觀察胼胝體區(qū)域髓鞘變化,利用GFAP免疫組化染色觀察星形膠質細胞。
　　結果:
　　1.CPZ模型小鼠與正常小鼠的比較
　　與正常組相比,隨著時間延長,在實驗結束時:①同期CPZ模型小鼠體重明顯下降(P<0.05);②旋轉棒實驗和曠場實驗發(fā)現(xiàn)運

7、動功能逐漸減退,實驗結束時部分小鼠幾乎不能維持在旋轉棒上(P<0.05),曠場試驗中CPZ模型小鼠爬行總路程下降,但通過曠場實驗中央路程比發(fā)現(xiàn)CPZ模型小鼠的探索習性并沒有受到影響(P>0.05);③LFB染色發(fā)現(xiàn)模型小鼠的髓鞘逐漸脫失,實驗結束時髓鞘幾乎完全脫失(P<0.05);④GFAP組化染色發(fā)現(xiàn)星形膠質細胞數(shù)量逐漸增多(P<0.05)。
　　2.大麻素WIN55,212-2對CPZ模型的治療作用
　　與同期DMSO對

8、照組比較發(fā)現(xiàn),注射大麻素WIN55,212-2組后:⑴CPZ模型小鼠體重下降趨勢明顯弱于DMSO對照組(P<0.05);⑵轉棒實驗發(fā)現(xiàn)給藥組運動功能弱于正常組,與DMSO對照組相比明顯改善(P<0.01);⑶LFB染色發(fā)現(xiàn)給藥組髓鞘脫失減緩(P<0.01),MBP免疫組化染色也驗證了此結果(P<0.01);⑷注射WIN55,212-2組GFAP細胞陽性表達數(shù)量明顯少于對照組。
　　結論:
　　1、WIN55,212-2能夠改

9、善CPZ脫髓鞘模型小鼠的體重和運動功能等整體狀態(tài)。
　　2、CPZ模型小鼠在5周末髓鞘完全脫失,能很好地模擬MS髓鞘脫失的病理變化,注射WIN55,212-2能夠減緩CPZ模型小鼠髓鞘的脫失,促進髓鞘的修復。
　　3、CPZ模型小鼠星形膠質細胞數(shù)量逐漸增多,這可能加速膠質瘢痕的形成影響髓鞘的修復;WIN55,212-2可能通過減少膠質瘢痕的形成來促進髓鞘的修復。
　　本次研究主要證明了大麻素WIN55,212-2對受免