熱休克蛋白90抑制劑BIIB021聯(lián)合雷公藤內(nèi)酯醇對急性T淋巴細胞白血病的治療與研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　 第一部分 目的:研究熱休克蛋白90(Hsp90)抑制劑BIIB021對人急性T淋巴細胞白血病細胞株Molt-4細胞增殖的抑制作用,為急性T淋巴細胞白血病(T-ALL)的臨床治療提供指導。
　　 方法:采用MTT法、流式細胞術檢測藥物處理前后,Molt-4細胞增殖和凋亡的變化:利用Hoechst33258熒光染色法觀察藥物作用前后細胞形態(tài)學的改變;運用流式細胞術檢測藥物作用后Molt

2、-4細胞周期阻滯情況:Western blot法檢測BIIB021對Molt-4細胞周期和凋亡相關蛋白的調(diào)控以及Akt、p65蛋白表達的變化。
　　 結果:MTT法檢測結果顯示BIIB021能抑制Molt-4細胞的增殖,并且隨著藥物劑量增大、作用時間延長,細胞增殖抑制率逐漸上升,具有濃度、時間依賴性,48h、72h的藥物半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為384.6nM、301.8nM,流式細胞術可檢測到細胞凋亡;Hoechst332

3、58熒光染色可觀察到典型的凋亡小體;流式細胞術檢測BIIB021能阻滯細胞于G0/G1期;Western blot結果顯示BIIB021激活caspase-8、-9、-3和PARP,下調(diào)CDK4/6,上調(diào)p21和p18,并能明顯抑制Akt和p65。
　　 結論:BIIB021能激活死亡受體途徑和線粒體途徑誘導Molt-4細胞凋亡,并通過影響CDK4/6、p21、p18使得Molt-4細胞被阻滯于G0/G1期,抑制細胞增殖,BII

4、B021對Molt-4的Akt和NF-κ B也有抑制作用。
　　 第二部分 目的:研究熱休克蛋白90(Hsp90)抑制劑BIIB021聯(lián)合雷公藤內(nèi)酯醇(TPL)對Molt-4的殺傷作用,并進一步探討其作用機制,為急性T淋巴細胞白血病臨床治療提供新的思路。
　　 方法:采用MTT法、流式細胞術檢測BIIB021、TPL單藥及聯(lián)合對Molt-4細胞增殖抑制作用和凋亡情況;Hoechst33258熒光染色法觀察藥物處理后細胞凋

5、亡的形態(tài)學變化;流式細胞術檢測細胞周期;Western blot檢測BIIB021對細胞凋亡相關蛋白的調(diào)控以及p53、MDM2蛋白的變化。
　　 結果:BIIB021與TPL聯(lián)合具有協(xié)同抑制Molt-4細胞增殖的作用,流式細胞術結果顯示聯(lián)合處理能引起更多的細胞凋亡;Hoechst33258熒光染色觀察到聯(lián)合組比單藥組細胞凋亡更明顯;聯(lián)合用藥并沒有增強細胞G0/G1期阻滯;Western blot結果顯示,BIIB021與TPL聯(lián)