KAI1基因在人肺癌細(xì)胞株中表達(dá)水平及調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、背景與目的：肺癌是當(dāng)今世界上對人類健康和生命危害最大的惡性腫瘤。近半個(gè)世紀(jì)以來，世界上許多國家和地區(qū)，肺癌的發(fā)病率和死亡率均持續(xù)上升。侵襲和轉(zhuǎn)移是肺癌的惡性標(biāo)志和特征，也是導(dǎo)致肺癌患者治療失敗和死亡的主要原因。肺癌侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟、多階段發(fā)生及多基因參與調(diào)控的過程。已有的研究表明，參與調(diào)控肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的基因包括正向調(diào)控和負(fù)向調(diào)控基因，KAIl基因可能是一種肺癌侵襲轉(zhuǎn)移正向調(diào)控基因，即抑制肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的基因。KAIl基因?qū)偎目缒こ易?/p>

2、(transmembrance-4-superfamily，TM4SF)的成員，其結(jié)構(gòu)為細(xì)胞膜糖蛋白，具有4個(gè)高度保守的跨膜結(jié)構(gòu)區(qū)。KAIl蛋白對多種腫瘤的轉(zhuǎn)移具有抑制作用，其表達(dá)下調(diào)與前列腺癌、胰腺癌、肺癌、結(jié)腸癌和膀胱癌的淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有關(guān)KAIl基因調(diào)控肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)理，以及與nm23-Hl基因在調(diào)控肺癌轉(zhuǎn)移中的相互關(guān)系等問題均未闡明。 本研究的目的是：(1)探討不同組織學(xué)類型的人肺癌細(xì)胞株和正常人成纖維

3、細(xì)胞株MRC-5中KAll基因mRNA的表達(dá)水平及差異；(2)探討不同轉(zhuǎn)移潛能的人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中KAll基因mRNA表達(dá)水平，以及KAll基因和nm23-H1基因在調(diào)控肺癌轉(zhuǎn)移中的相互關(guān)系；(3)探討去甲基化藥物5-Aza-CdR對L9981、GLC-82和NCI-H460肺癌細(xì)胞株KAll基因mRNA表達(dá)水平的影響；以及5-Aza-CdR對L9981、NCI-H460和GLC-82肺癌細(xì)胞株細(xì)胞形態(tài)和體外增殖能力的影響。

4、方法：(1)應(yīng)用real-time RT-PCR技術(shù)，檢測正常人肺成纖維細(xì)胞MRC-5和L9981、NL9980、L9981-nm23-H1-pEGFP、A549、GLC-82、A2、SPCA-1、NCI-H460、SH-77、NCI-H446、LTEP-α-2、YTMLC-90 12個(gè)人肺癌細(xì)胞株KAll基因mRNA的表達(dá)水平；(2)應(yīng)用real-time RT-PCR技術(shù)檢測去甲基化藥物5-Aza-CdR對L9981、GLC-82和

5、NCI-H460肺癌細(xì)胞株KAll基因mRNA表達(dá)水平的影響；(3)在倒置顯微鏡下觀察5-Aza-CdR對NCI-H460，L9981和GLC-82肺癌細(xì)胞株細(xì)胞形態(tài)的影響；(4)應(yīng)用MTT法繪制細(xì)胞生長曲線，觀察去甲基化試劑5-mza-CdR對人肺癌細(xì)胞株L9981、NCI-H460和GLC-82體外增殖能力的影響。 結(jié)果：(1)L9981細(xì)胞株KAll基因mRNA表達(dá)水平顯著低于NL9980細(xì)胞株和L9981-nm23-H1

6、-pEGFP細(xì)胞株(P=0.000);但NL9980細(xì)胞株與L9981-nm23-H1-pEGFP細(xì)胞株間KAll基因mRNA表達(dá)水平比較則無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.892)。(2)MRC-5細(xì)胞株KAll基因mRNA表達(dá)水平顯著高于12個(gè)人肺癌細(xì)胞株(P=0.002～0.000);NL9980和L9981-nm23-H1-pEGFP細(xì)胞株KAll基因mRNA表達(dá)水平均顯著高于A549、GLC-82、A2、SPCA-1、NCI-H460、S

7、H-77、NCI-H446，LTEP-α-2和YTMLC-90細(xì)胞株(P=0-012～0.000)：A549、GLC-82，A2和SPCA-1細(xì)胞株KAll基因mRNA表達(dá)水平顯著高于NCI-H460和SH-77細(xì)胞株(P=0.001～0.000);NCI-H460細(xì)胞株KAll基因mRNA表達(dá)水平顯著高于SH-77細(xì)胞株(P=0.000)；NCI-H446細(xì)胞株KAIl基因mRNA表達(dá)水平顯著高于LTEP-α-2和YTMLC-90細(xì)胞

8、株(P=0.037～0.000)；SPCA-l細(xì)胞株KAIl基因mRNA表達(dá)水平顯著高于LTEP-α-2細(xì)胞株(p=0.002)。(3)L9981細(xì)胞株KAll基因mRNA表達(dá)水平顯著低于NL9980、L9981-nm23-H1-pEGFP、A549、GLC-82、A2,SPCA-1、NCI-H446，LTEP-α-2和YTMLC-90細(xì)胞株(p=0.007～0.000)；A549細(xì)胞株KAIl基因mRNA表達(dá)水平顯著低于NCI-H44

9、6細(xì)胞株(p=0.005)；A2細(xì)胞株KAIl基因mRNA表達(dá)水平顯著低于SPCA-1，NCI-H446和YTMLC-90細(xì)胞株(P=0.000～0.040)：NCI-H460細(xì)胞株KAIl基因mRNA表達(dá)水平顯著低于NCI-H446，LTEP-α-2和YTMLC-90細(xì)胞株(p=0.002～0.000)；SH-77細(xì)胞株KAll基因mRNA表達(dá)水平顯著低于NCI-H446，LTEP-α-2和YTMLC-90細(xì)胞株(p=0.000)；L

10、TEP-α-2細(xì)胞株KAIl基因mRNA表達(dá)水平顯著低于YTMLC-90細(xì)胞株(p=0.012)。(4)L9981細(xì)胞株與NCI-H460細(xì)胞株間KAIl基因mRNA表達(dá)水平比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.651)；NL9980細(xì)胞株與L9981-nm23-H1-pEGFP細(xì)胞株間KAIl基因mRNA表達(dá)水平比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.892)；A549細(xì)胞株與GLC-82、A2、SPCA-l，LTEP-α-2和YTMLC-90細(xì)胞株間KAll

11、基因mRNA表達(dá)水平比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.078～0.717)；GLC-82細(xì)胞株與A2、SPCA-1，LTEP-α-2和YTMLC-90細(xì)胞株間KAll基因mRNA表達(dá)水平比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.054～0.368)；A2細(xì)胞株與LTEP-α-2細(xì)胞株間KAIl基因mRNA表達(dá)水平比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=O.588)；SPCA-1細(xì)胞株與NCI-H446、YTMLC-90細(xì)胞株間KAIl基因mRNA表達(dá)水平比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0

12、.167～0.443)。(5)2μmol/L和10μmol/L 5-Aza-CdR組NCI-H460肺癌細(xì)胞株KAIl基因mRNA表達(dá)水平顯著高于對照組NCI-H460肺癌細(xì)胞株(P=0.001和P=0.000)；10μmol/L 5-Aza-CdR組NCI-H460細(xì)胞株KAIl基因mRNA的表達(dá)水平亦顯著高于2 μmol/L 5-Aza-CdR組(P=0.005)。(6)2μmol/L和10μmol/L 5-Aza-CdR組L998

13、1肺癌細(xì)胞株KAIll基因mRNA表達(dá)水平均顯著高于對照組L9981肺癌細(xì)胞株(P=0.000)；10μmol／L 5-Aza-CdR組L9981細(xì)胞株KAll基因mRNA的表達(dá)水平亦顯著高于2μmol／L 5-Aza-CdR組L9981細(xì)胞株(P＝0.016)。(7)對照組GLC-82細(xì)胞株與2μmol／L 5-Aza-CdR組和1 0μmol／L 5-Aza-CdR組GLC-82細(xì)胞株問KAIl基因mRNA表達(dá)水平經(jīng)F檢驗(yàn)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差

14、異(P=0.914)。(8)對照組NCI-H460和L9981細(xì)胞株中，腫瘤細(xì)胞為多角形、形狀不規(guī)則，細(xì)胞呈貼壁生長，懸浮細(xì)胞少；2μmol／L 5-Aza-CdR組腫瘤細(xì)胞部分細(xì)胞體積增大、形狀不規(guī)則，細(xì)胞密度減小，懸浮細(xì)胞增多；10μmo1／L 5-Aza-CdR組腫瘤細(xì)胞密度明顯減小，懸浮細(xì)胞增多，部分細(xì)胞變圓、體積縮小、胞膜完整、胞質(zhì)濃集，出現(xiàn)凋亡細(xì)胞形態(tài)。GLC-82細(xì)胞株對照組與實(shí)驗(yàn)組間細(xì)胞形態(tài)無明顯變化。(9)2μmol／

15、L 5-Aza-CdR和10μmol／L 5-Aza-CdR處理L9981和NCI-H460肺癌細(xì)胞株OD值和生長曲線均顯著低于對照組L9981和NCI-H460肺癌細(xì)胞株(P=0.000)，10μmol／L 5-Aza-CdR處理L9981和NCI-H460肺癌細(xì)胞株OD值和生長曲線均顯著低于2μmol／L 5-Aza-CdR組(P=0.00)。(10)2μmol／L 5-Aza-CdR和10μmol／L 5-Aza-CdR對GLC-

16、82人肺癌細(xì)胞株體外增殖能力無明顯影響。 結(jié)論：(1)不同組織學(xué)類型人肺癌細(xì)胞株中KAll基因mRNA表達(dá)水平均顯著低于正常肺成纖維細(xì)胞株MRC-5；(2)不同轉(zhuǎn)移潛能人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中KAll基因mRNA表達(dá)水平有明顯差異，nm23-Hl基因轉(zhuǎn)染能顯著上調(diào)人高轉(zhuǎn)移大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中KAIl基因mRNA表達(dá)水平；(3)5-Aza-CdR能顯著上調(diào)人肺癌細(xì)胞株L9981和NCI-H460 KAII基因mRNA表達(dá)水平，并抑制其體