KAI1基因轉(zhuǎn)染人胰腺癌細(xì)胞的蛋白表達(dá)及增殖能力的研究.pdf

1、KAI1基因是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種與腫瘤轉(zhuǎn)移抑制有關(guān)的基因,又稱CD82分子.該基因?qū)δ[瘤轉(zhuǎn)移的這種抑制作用已引起廣大學(xué)者的關(guān)注,因此探討KAI1基因抑制胰腺癌轉(zhuǎn)移的有關(guān)機(jī)制具有重要的實(shí)際意義.方法 人胰腺癌細(xì)胞系MiaPacaII為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞,在含10﹪胎牛血清的DMEM完全培養(yǎng)液中,37℃和5℃CO<,2>條件下培養(yǎng),約3天換液一次,并以0.25﹪的胰蛋白酶消化傳代.采用指質(zhì)體介導(dǎo)法將含有目的基因的載體pCMV-KAI1導(dǎo)入上述細(xì)胞系中

2、,同時(shí)以空載體pCMV-neo為陰性對(duì)照,并以G418 400μg/ml進(jìn)行陽性篩選.用SP免疫細(xì)胞化學(xué)方法,以MiaPacaII細(xì)胞為空白對(duì)照,pCMV-MiaPacaII細(xì)胞作陰性對(duì)照,結(jié)腸癌組織作陽性對(duì)照來檢測轉(zhuǎn)染pCMV-KAI1、pCMV-neo及未轉(zhuǎn)染MiaPacaII細(xì)胞的CD82表達(dá).在確定轉(zhuǎn)染成功之后,用MTT(四唑藍(lán))法及集落形成實(shí)驗(yàn)檢測該細(xì)胞系在轉(zhuǎn)染前后其增殖能力的改變,以探討KAI1基因?qū)σ认侔┘?xì)胞增殖能力的影響

3、.結(jié)論①重組KAI1基因轉(zhuǎn)染人胰腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系MiaPacaII后,不僅可明顯的抑制其生長,而且還可表達(dá)其翻譯的KAI1/CD82蛋白質(zhì).②通過MTT實(shí)驗(yàn)和集落形成實(shí)驗(yàn)說明KAI1基因?qū)胍认侔┘?xì)胞系后,其增殖能力較轉(zhuǎn)染前及轉(zhuǎn)染空載體pCMV-neo者下降,這也可能使細(xì)胞系的侵襲轉(zhuǎn)移能力降低,進(jìn)而使其惡性程度下降.③這些實(shí)驗(yàn)將為今后利用KAI1基因在胰腺癌基因治療等方法提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù).④脂質(zhì)體介導(dǎo)的KAI1基因轉(zhuǎn)染入胰腺癌細(xì)胞