內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與視網(wǎng)膜脫離后細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的:檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑兩個(gè)不同階段的標(biāo)志物GRP78、GADD153 在視網(wǎng)膜脫離后不同時(shí)期的表達(dá)與定位，探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑是否參與了視網(wǎng)膜脫離后的細(xì)胞凋亡過(guò)程。 方法:通過(guò)向Wistar 大鼠左眼視網(wǎng)膜下注射10mg/ml 透明質(zhì)酸鈉制造視網(wǎng)膜脫離模型，在脫離后不同時(shí)間點(diǎn)摘除眼球制作石蠟病理切片，光鏡下行組織學(xué)檢查；運(yùn)用先進(jìn)的熒光TUNEL 聯(lián)合激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)視網(wǎng)膜的細(xì)胞凋亡情況；用半定量RT-PCR 檢測(cè)G

2、RP78、GADD153 mRNA 的表達(dá)；用Western blot 檢測(cè)GRP78、GADD153 蛋白水平的表達(dá)；運(yùn)用免疫熒光聯(lián)合激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)GRP78、GADD153 在視網(wǎng)膜的表達(dá)與分布。 結(jié)果:組織學(xué)檢查顯示視網(wǎng)膜脫離后,發(fā)生了一系列組織病理改變：光感受器外節(jié)的縮短與缺失，光感受器細(xì)胞、雙極細(xì)胞、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、神經(jīng)纖維層的變性，Müller 細(xì)胞纖維的斷裂等，其中光感受器細(xì)胞數(shù)目的減少是最顯著的改變。視網(wǎng)膜脫

3、離后8d 內(nèi)出現(xiàn)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，高峰在2-4d，主要集中在光感受器細(xì)胞層。GRP78 mRNA、GADD153 mRNA 在視網(wǎng)膜脫離后1/2d、1d、2d、4d 表達(dá)顯著升高；GRP78 蛋白在視網(wǎng)膜全層均可見(jiàn)表達(dá)，脫離后1/2d、1d、2d、4d、8d、16d、32d 表達(dá)顯著升高，其中8d、16d、32d 表達(dá)最高；GADD153蛋白主要在光感受器細(xì)胞層可見(jiàn)表達(dá)，在脫離后1/2d、1d、2d、4d表達(dá)顯著升高。GADD153 的表達(dá)