熊果酸體外吸收及代謝機制的研究.pdf

1、目的：采用Caco-2細胞模型及肝微粒體代謝體系對熊果酸(Ursolic acid,UA)在體外的吸收特征及代謝機制進行系統(tǒng)研究，為深入探討UA的藥代動力學特征及其藥理學作用機制提供試驗和理論依據(jù)。 方法：建立反相高效液相-紫外檢測方法，測定Caco-2細胞內(nèi)外及肝微粒體系溫孵液中UA的濃度；建立及全面評價Caco-2單層細胞特性：考察時間、底物濃度、體系溫度以及培養(yǎng)介質(zhì)PH值在Caco-2細胞對UA攝取中的影響：比較P-糖蛋白

2、(P-plycoprotein,P-gp)抑制劑維拉帕米(Verapamil,Ver)存在與否時，UA跨Caco-2細胞膜轉(zhuǎn)運的不同之處，探究UA在Caeo-2細胞攝取和轉(zhuǎn)運試驗中的外排現(xiàn)象；選取地塞米松、苯巴比妥、β-萘黃酮對SD大鼠進行在體誘導，采用鈣離子沉淀法制備和構建肝微粒體代謝系統(tǒng)，以UA作為反應底物考察其在大鼠肝微粒體系中的代謝行為和特征。 結(jié)果：①TranswellTM 板上培養(yǎng)21天后的Caco-2細胞單層結(jié)構緊

3、密、TEER值＞500Ω·cm2、羅丹明標記葡聚糖不能通透。②在10～40μM濃度范圍內(nèi)，Caco-2細胞對UA攝取量隨濃度增加呈線性增加，20min內(nèi)攝取量逐漸上升，而后趨于穩(wěn)態(tài)；pH為5.5時，Caco-2細胞對UA攝取量最大，且隨體系PH值上升而下降；溫度分別為4℃、25℃、37℃時Caco-2細胞對UA攝取量比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。③加入P-gp專屬性抑制Ver后，UA在Caco-2細胞單層轉(zhuǎn)運模型中的表觀滲透系數(shù)發(fā)生

4、顯著改變，表觀滲透率由3.445下降至1.386。④UA在大鼠肝微粒體系的代謝呈現(xiàn)酶代動力學特征，代謝產(chǎn)物生成量與底物UA的濃度具較好的相關性(r=0.975)。⑤經(jīng)典CYP3A誘導劑DEX可以顯著的促進UA在肝微粒體中的代謝，與空白對照組相比差異顯著(P＜0.05)，而CYP1A誘導劑BNF和CYP2B誘導劑PB對UA肝微粒體代謝無明顯的影響(P＞0.05)。 結(jié)論：本研究建立的完整Caco-2單層細胞模型符合藥物轉(zhuǎn)運試驗的要