HDAC6基因上調(diào)表達(dá)對胃癌細(xì)胞株SGC-7901生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：觀察組蛋白去乙?；?(histone deacetylase6，HDAC6)上調(diào)表達(dá)對胃癌SGC-7901細(xì)胞株的增殖以及常規(guī)化療藥誘導(dǎo)其凋亡的影響，并初步探討以HDAC6為靶點治療胃癌的可行性。 方法：培養(yǎng)胃癌細(xì)胞株SGC-7901、BGC-823，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測HDAC6的表達(dá)，選擇表達(dá)相對高的細(xì)胞株進(jìn)行實驗；HDAC6真核表達(dá)載體pCDNA3.1-HDAC6-FLAG用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞株SGC-7901

2、，G418篩選陽性克隆；采用Western blot從蛋白水平檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞HDAC6的表達(dá)；細(xì)胞生長曲線(MTT法)測定和集落形成試驗檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞的增殖情況；流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞對常規(guī)化療藥誘導(dǎo)的凋亡的敏感性。 結(jié)果：(1)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測顯示SGC-7901、BGC-823細(xì)胞的胞漿均可見HDAC6表達(dá)，但表達(dá)水平SGC-7901明顯高于BGC-823(0.28±0.07 VS 0.19±0.04，P<0.05).(2)We

3、stern blot檢測顯示，轉(zhuǎn)染了pCDNA3.1-HDAC6-FLAG的SGC-7901細(xì)胞HDAC6蛋白表達(dá)水平明顯高于非轉(zhuǎn)染組及空載體組(3591.52±2 37.65 vs 1 899.9 3±1 33.4 3、1685.59±1 76.70，P<0.05). (3)細(xì)胞生長曲線測定和集落形成試驗均提示轉(zhuǎn)染細(xì)胞增殖能力較未轉(zhuǎn)染組和空載體組明顯增強(qiáng)(P<0.05)。 (4)流式細(xì)胞儀檢測顯示轉(zhuǎn)染組細(xì)胞可抑制常規(guī)化