從胰島細(xì)胞胰島素抵抗研究開(kāi)郁清胃方對(duì)T2DM模型大鼠糖代謝的影響.pdf

1、研究背景：胰島素抵抗和胰島β細(xì)胞功能缺陷是2型糖尿病的兩大基本病理特征和發(fā)病基礎(chǔ)，這已為國(guó)際糖尿病學(xué)界所共識(shí)。最近幾年，隨著對(duì)2型糖尿病發(fā)病機(jī)制研究的深入，胰島細(xì)胞自身的胰島素抵抗(包括β和α細(xì)胞胰島素抵抗)問(wèn)題逐漸被人們所認(rèn)識(shí)：胰島細(xì)胞上同樣存在胰島素受體及其下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路；胰島細(xì)胞不僅是胰島素等的分泌細(xì)胞，同時(shí)也是胰島素作用的靶細(xì)胞。同外周組織一樣，胰島細(xì)胞的胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的任何環(huán)節(jié)障礙也可以導(dǎo)致胰島素抵抗，即在胰島細(xì)胞水平

2、上的胰島素抵抗或叫做胰島細(xì)胞自身的胰島素抵抗，它直接導(dǎo)致了胰島細(xì)胞功能的障礙。胰島素抵抗和胰島β細(xì)胞功能受損在胰島細(xì)胞水平的這種直接關(guān)聯(lián)可能是2型糖尿病發(fā)病機(jī)制中的重要環(huán)節(jié)，胰島細(xì)胞自身的胰島素抵抗，尤其在2型糖尿病早期，可能是糖尿病防治的一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。但對(duì)于它的認(rèn)識(shí)和研究只是近年才剛剛開(kāi)始，目前僅在動(dòng)物模型上初步闡述了胰島細(xì)胞水平胰島素抵抗的分子生物學(xué)機(jī)制，而應(yīng)用藥物干預(yù)的研究尚未展開(kāi)。 我們根據(jù)2型糖尿病和胰島素抵抗的發(fā)病規(guī)律

3、，認(rèn)為其發(fā)病的早期特點(diǎn)與中醫(yī)“肝胃郁熱證”相吻合，所以在糖尿病胰島素抵抗的治療中立清瀉肝胃郁熱的治法，在張仲景大柴胡湯的基礎(chǔ)上，創(chuàng)立了開(kāi)郁清胃方，并運(yùn)用開(kāi)郁清胃方進(jìn)行了多項(xiàng)臨床和實(shí)驗(yàn)研究，均取得了良好的效果，并且在整體水平、組織細(xì)胞水平和分子水平初步闡述了其作用機(jī)理(包括減輕甘油三脂的異位沉積，提高受體數(shù)目和結(jié)合力，影響胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)等)。近期的研究發(fā)現(xiàn)開(kāi)郁清胃方臨床可以改善糖尿病患者的胰島細(xì)胞分泌功能，提示其在胰島細(xì)胞功能方面有干

4、預(yù)作用。胰島細(xì)胞自身胰島素抵抗這一概念的提出為該藥物的改善胰島細(xì)胞功能的作用機(jī)理研究搭建了一個(gè)重要的研究平臺(tái)。 研究目的：從胰島細(xì)胞胰島素抵抗的角度探討中藥復(fù)方開(kāi)郁清胃方對(duì)2型糖尿病模型大鼠胰島細(xì)胞分泌功能的影響。 研究方法：本實(shí)驗(yàn)以高脂喂養(yǎng)9周加小劑量鏈脲佐菌素(STZ，15mg/kg體重)腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型，通過(guò)測(cè)定空腹血糖、葡萄糖負(fù)荷后2小時(shí)血糖以及糖化血清蛋白、基礎(chǔ)胰島素水平等評(píng)價(jià)開(kāi)郁清胃方對(duì)2型糖尿

5、病模型大鼠糖代謝的影響，采用高胰島素正葡萄糖鉗夾技術(shù)(Clamp)評(píng)價(jià)整體的胰島素抵抗，靜脈糖耐量(IVGTT)評(píng)估胰島細(xì)胞功能，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色、計(jì)算機(jī)圖像定量分析等方法和技術(shù)研究胰島β細(xì)胞胰島素(INS)和α細(xì)胞胰高糖素(Glc)的分泌變化以及胰島素受體(IRc)、胰島素受體底物-1(IRS-1)的表達(dá)，并利用胰島細(xì)胞分離技術(shù)分離實(shí)驗(yàn)各組大鼠胰島，體外進(jìn)行葡萄糖的孵育，觀察了胰島細(xì)胞的體外分泌功能，從而系統(tǒng)研究開(kāi)郁清胃方對(duì)模型大

6、鼠糖代謝的影響，并從胰島細(xì)胞胰島素抵抗的角度初步進(jìn)行了機(jī)理探討。 研究結(jié)果：1、高脂喂養(yǎng)9周加小劑量STZ(15mg/kg體重)腹腔注射建立的糖尿病大鼠模型符合2型糖尿病的發(fā)病特點(diǎn)：同時(shí)具有胰島素抵抗、胰島素分泌的異常和血糖的明顯增高。 2、開(kāi)郁清胃方可明顯降低該大鼠模型的空腹血糖、葡萄糖負(fù)荷后2小時(shí)血糖以及糖化血清蛋白，提高基礎(chǔ)胰島素水平。 3、開(kāi)郁清胃方可明顯減少模型大鼠正糖鉗夾試驗(yàn)中穩(wěn)態(tài)葡萄糖的輸注率，提高

7、胰島素敏感性。 4、開(kāi)郁清胃方治療后的模型大鼠IVGTT中0-30分鐘和0-120分鐘血糖曲線(xiàn)下面積顯著低于模型組，相應(yīng)的各時(shí)相的胰島素分泌曲線(xiàn)下面積則明顯大于模型組。 5、離體胰島細(xì)胞葡萄糖刺激試驗(yàn)顯示開(kāi)郁清胃治療組的胰島素水平顯著高于模型組。 6、胰島的免疫組織化學(xué)染色顯示開(kāi)郁清胃方可以提高胰島細(xì)胞胰島素受體和胰島素受體底物-1的表達(dá)，提示其可以改善胰島細(xì)胞的胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而改善胰島素對(duì)胰島細(xì)胞的作用