氨基胍對糖尿病創(chuàng)面愈合作用的影響及其機(jī)理的研究.pdf

1、研究目的 通過建立糖尿病大鼠燙傷創(chuàng)面難愈模型，了解糖尿病狀態(tài)下創(chuàng)面愈合的規(guī)律，闡述糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)蓄積與氧化應(yīng)激在糖尿病創(chuàng)面難愈發(fā)生中的作用，研究應(yīng)用氨基胍對糖尿病燙傷創(chuàng)面愈合的影響，開展氨基胍防治糖尿病創(chuàng)面難愈的臨床前藥效學(xué)研究。 研究方法 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分為預(yù)防性應(yīng)用氨基胍的長病程糖尿病實(shí)驗(yàn)(A)、治療性應(yīng)用氨基胍的長病程糖尿病實(shí)驗(yàn)(B)和治療性應(yīng)用氨基胍的短病程糖尿病實(shí)驗(yàn)(C)三部分。A實(shí)驗(yàn)是在糖尿病

2、模型成功的同時(shí)給予氨基胍，再經(jīng)6周飼養(yǎng)后致傷；B實(shí)驗(yàn)是先建立糖尿病模型，再經(jīng)6周飼養(yǎng)后致傷，致傷當(dāng)天應(yīng)用氨基胍；C實(shí)驗(yàn)則是糖尿病模型成功后不經(jīng)6周飼養(yǎng)，即予燙傷并同時(shí)應(yīng)用氨基胍。每部分實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為：非糖尿病對照組、糖尿病對照組和氨基胍干預(yù)組，氨基胍干預(yù)組每日管飼氨基胍100mg/Kg體重。以致傷當(dāng)天未燙傷大鼠為0時(shí)相點(diǎn)，檢測燙傷后3、7、14和2l天時(shí)相點(diǎn)各組創(chuàng)面愈合率，0時(shí)相點(diǎn)皮膚組織糖含量、AGEs熒光強(qiáng)度、膠原溶解度，傷后各時(shí)

3、相點(diǎn)血漿中糖化血漿蛋白(GSP)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、H<,2>0<,2>等含量。 體外實(shí)驗(yàn)分為AG對葡萄糖自發(fā)氧化形成AGEs以及對H<,2>0<,2>干預(yù)下成纖維細(xì)胞功能的影響兩部分。前者運(yùn)用葡萄糖與牛血清白蛋白(BSA)體外氧化形成AGEs，檢測AG對AGEs形成及其過程中乙二醛(G0)、H<,2>0<,2>產(chǎn)生的影響，觀察AGEs對大鼠白細(xì)胞活性氧產(chǎn)生的影響；后者運(yùn)用H<,2>0<,2>干預(yù)大鼠成纖維細(xì)

4、胞，檢測AG對H<,2>O<,2>干預(yù)下細(xì)胞凋亡、活性氧(ROS)、GSH、MDA、AGEs等含量變化的影響。 研究結(jié)果 A實(shí)驗(yàn)中，預(yù)防性應(yīng)用氨基胍后，與糖尿病對照組相比，創(chuàng)面愈合率顯著增加，AGEs顯著降低，皮膚膠原溶解度顯著上升，而皮膚組織糖含量無顯著變化。B實(shí)驗(yàn)中，傷后應(yīng)用氨基胍可顯著促進(jìn)長病程糖尿病大鼠創(chuàng)面愈合，并可使糖尿病狀態(tài)下升高的血漿G0和H<2>O<,2>顯著下降，下降的GSH顯著升高；而對糖尿病狀態(tài)下升

5、高的GSP影響不明顯。 C實(shí)驗(yàn)中，短病程糖尿病組織中AGEs蓄積不顯著，但血漿MDA顯著升高；短其應(yīng)用氨基胍不能顯著抑制AGEs蓄積，但可顯著降低MDA含量，改善氧化應(yīng)激。 葡萄糖在開放的有氧環(huán)境中可發(fā)生自發(fā)氧化形成AGEs，此過程中可產(chǎn)生GO、H<,2>O<,2>；GO也可形成AGEs，但可被氨基胍顯著抑制；AGEs可使白細(xì)胞活性氧釋放增加，呈現(xiàn)出劑量依賴關(guān)系。 H<,2>O<,2>使成纖維細(xì)胞活力下降，呈現(xiàn)劑