精子肽的合成及ELISA檢測(cè)方法的建立和初步應(yīng)用.pdf

1、據(jù)報(bào)道，免疫性不孕最近幾年發(fā)病率逐年上升。研究表明抗精子抗體是導(dǎo)致免疫性不孕的重要原因之一，抗精子抗體的檢測(cè)方法很多，其中臨床上又以酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)應(yīng)用較廣泛。該方法通常是利用具正常生育能力者的精子直接包被酶標(biāo)板或制成包被抗原來(lái)包被酶標(biāo)板，但其穩(wěn)定性和重復(fù)性不理想，且精子來(lái)源有限,從而限制了它在臨床上的推廣應(yīng)用。固相多肽合成技術(shù)的發(fā)展為解決這一問(wèn)題帶來(lái)了希望，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，我們選取了5條特異性精子肽，采用固相多肽合成法(so

2、lid phase polypeptide synthesis SPPS),以N-a-Fmoc-氨基酸為原料，F(xiàn)moc-aa-Wang樹(shù)脂為固相載體，20％六氫吡啶的DMF溶液為脫保護(hù)試劑，以TBTU/HoBT作為偶聯(lián)試劑/活化劑,經(jīng)過(guò)脫保護(hù)-洗滌-縮合-洗滌循環(huán)步驟，從C端-N端的順序依次偶聯(lián)氨基酸,直至所需目的肽段，最后由切肽試劑將合成多肽從樹(shù)脂上裂解下來(lái)，同時(shí)脫去所有側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)，最終合成了5條特異性精子肽.所得粗肽再經(jīng)過(guò)離子交換

3、層析和反相高效液相色譜純化鑒定，得到了純度>95％的精子肽。 利用5條合成肽分別包被酶標(biāo)板建立ELISA方法檢測(cè)抗精子抗體，結(jié)果表明，各肽段抗體反應(yīng)性存在明顯的差異。因此，我們選擇了2個(gè)高抗體反應(yīng)性的肽段（YLP12,P69），并建立了以組合肽為包被抗原的檢測(cè)抗精子抗體的ELISA方法，與商品化的抗精子抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒相比，結(jié)果顯示，組合肽包被的ELISA方法與商品化試劑盒檢測(cè)結(jié)果二者有良好的符合率，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并無(wú)明顯差異