抑制核轉(zhuǎn)錄因子活化逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞株耐藥性研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文抑制核轉(zhuǎn)錄因子活化逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞株耐藥性研究姓名：傅庭煥申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：普通外科學(xué)指導(dǎo)教師：王強(qiáng);胡志前20040401摘要目的：探討核因子- l c B 活化在胃癌細(xì)胞株耐藥性機(jī)制中的作用。為逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞株耐藥性提供新靶點(diǎn)。方法：誘導(dǎo)培養(yǎng)胃癌細(xì)胞耐藥亞株S G C 7 9 0 1 ／A D M ，應(yīng)用M T T 法檢測阿霉素對(duì)S G C 7 9 0 1 ／A D M 和S G C 7 9 0 1 胃癌細(xì)胞

2、株的細(xì)胞毒作用，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測S G C 7 9 0 1 ／A D M 和S G C 7 9 0 1 胃癌細(xì)胞林凋亡率的變化，應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法和W e s t e r n 蛋白印跡法檢測胃癌細(xì)胞株中的核因子- K B 活化。以吡咯烷二硫代氨基甲酸J 1 ％' ( P T D C ) 抑制核因子一1 c B 活化后，應(yīng)用M T T 法檢測阿霉素對(duì)S G C 7 9 0 I ／A D M 胃癌細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用。結(jié)果：S

3、G C 7 9 0 1 I A D M 相對(duì)耐藥度較親本細(xì)胞提高了8 ．9 倍，阿霉素所導(dǎo)致的S G C 7 9 0 1 ／A D M 胃癌細(xì)胞株凋亡率明顯下降。核因子．K B 活化程度在S G C 7 9 0 I ／A D M 胃癌細(xì)胞株中明顯提高，P T D C 抑制核因子一K B 活化后可提高阿霉素對(duì)S G C 7 9 0 1 ／A D M 胃癌細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用。結(jié)論：核因予，K B 活化所導(dǎo)致的胃癌細(xì)胞株凋亡率下降在S G C

4、 7 9 0 1 ／A D M 胃癌細(xì)胞株耐藥性機(jī)制中發(fā)揮一定作用。抑制核因子．r d 3 活化后可逆轉(zhuǎn)s G C 7 9 0 l ／A D M 胃癌細(xì)胞株對(duì)阿霉素耐藥性。核因子．r d 3 是逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞株耐藥性的一個(gè)新靶點(diǎn)?！娟P(guān)鍵詞】阿霉素；核因子．1 c B ；耐藥性：胃癌細(xì)胞株；凋亡；P T D CA b s t r a c to b i e e t i v e ：T o i n v e s t i g a t e t h e

5、r e l a t i o n s h i p b e t w e e n a c t i v a t i o n o f N F ．K B a n dc h e m o r e s i s t a n c e i nh u m a n s t o m a c h c a n c e rc e l ll i n e ．T os e a r c hf o ra n e w t a r g e tp o i n to f r e v e r

6、 s i n gc h e m o r e s i s t a n ci ns t o m a c hc a n c e r ．M e t h o d s ：Al l u m a ns t o m a c hc a n c e re e l l l i n e r e s i s t a n t t o a d r i a m y c i n ( S G C 7 9 0 I I A D M ) w a s a c q u i r e d

7、 b ys t e p w i s e - i n c r e a s i n gc o n c e n t r a t i o n so f a d r i a m y c i ni nv i t r o ．T h ec y t o t o x i c i t yo f A D Mo nS G C 7 9 0 1 ／A D M a n d S G C 7 9 0 1s t o m a c h c a n c e re e l ll i

8、 n ew a s d e t e r m i n e db yM T Ta s s a y ．T h e l e v e l o f n u c l e a r f a c t o r - k a p p a B a c t i v i t y w a s m e a s u r e d b yi m m u n o h i s t o c h e m i e a ls t a i n i n g a n dW e s t e r n

9、b l o t ．T h e e f f e c t s o ft h e i n h i b i t i o no fi n d u c i b l en u c l e a rf a c t o r - k a p p a Ba c t i v a t i o n o nc h e m o r e s i s t a n c ea g a i n s t A D M b yP D T C w e r ei n t e r m i n

10、 e db vM T T a s s a ya n d f l o wc y o t o m e t r i ca n a l y s i sR e s u l t s ：T h eS G C 7 9 0 1 ／A D M s t o m a c he e l l l i n ew a s8 ．9 t i m e sm o r er e s i s t a n tt oa d r i a m y c i nt h a nt h eS G

11、 C 7 9 0 ls t o m a c h c e l l l i n e ．T h ea p o p t o s i sr a t eo f S G C 7 9 0 1 ／A D M s t o m a c h e e l ll i n ei n d u c e db ya d r i a m y c i nw a s m u c h l o w e r t h a nS G C 7 9 0 ls t o m a c h e e

12、l l l i n e ．T h el e v e l o f n u c l e a r f a c t o r - k a p p a B i n S G C 7 9 0 l ／A D M s t o m a c h e e l l l i n e w a ss i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n S G C 7 9 0 1 s t o m a c hc e l l l i n e

13、 ．A f t e r I n h i b i t i n g i n d u c i b l eN F ．K B a c t i v i t yb y p y r r o l i d i n ed i t h i o e a r b a m a t e ( P D T C ) ，t h e c y t o t o x i c i t yo f A D M o nS G C 7 9 0 l ／A D Ms t o m a c hc a

14、n c e l “ e e l ll i n ew a si n c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y ．C o n c l u s i o n ：T h ec h a n g eo f a p o p t o s i sr a t ei n d u c e db yN F 一1 c Ba c t i v i t ym a y b e p l a ya ni m p o r t a n tr o

15、l ei nc h e m o r e s i s t a n c e ．I n h i b i t i n gN F - r d 3a c t i v i t yc a nr e d u c ec h e m o r e s i s t a n c e t oa d r i a m y c i ni nh u m a n s t o m a c h c a n c e rc e l l1 ．n e ．N F —K B c o u l

16、db ea n e w t a r g e tp o i n to f r e v e r s i n g c h e m o r e s i s t a n c i ns t o m a c h c a n c e lK e y w o r d sA d r i a m y c i n ：n u c l e a r f a c t o r - k a p p a B ；c h e m o r e s i s t a n c e ；s