姜黃素體外逆轉(zhuǎn)人胃癌細(xì)胞SGC7901-VCR多藥耐藥性.pdf

1、腫瘤細(xì)胞對(duì)一種抗腫瘤藥物出現(xiàn)耐藥的同時(shí)，對(duì)其他結(jié)構(gòu)不同、作用靶位不同的抗腫瘤藥物也產(chǎn)生抗藥性的現(xiàn)象稱(chēng)為多藥耐藥(Multidrugresistance，MDR)。MDR降低了化療藥物在胃癌治療中的效果，成為胃癌治療中的一大障礙。為尋找有效逆轉(zhuǎn)MDR的藥物，中外學(xué)者進(jìn)行了廣泛的研究。維拉帕米(verapamil，VRP)、環(huán)胞霉素A等化學(xué)致敏劑雖有逆轉(zhuǎn)MDR的功效，但因其毒副作用，使臨床應(yīng)用受到限制。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者積極尋找高效、低毒、作用

2、靶點(diǎn)廣泛的腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑，許多學(xué)者把目光轉(zhuǎn)向天然藥物。中藥資源豐富，作用靶點(diǎn)多，可針對(duì)多藥耐藥機(jī)制復(fù)雜的特點(diǎn)，現(xiàn)有研究亦提示開(kāi)發(fā)中藥腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑有較好的前景。 目的：觀察植物提取物姜黃素在無(wú)細(xì)胞毒性作用濃度(低濃度)下，是否可逆轉(zhuǎn)多藥耐藥胃癌細(xì)胞SGC7901/VCR對(duì)長(zhǎng)春新堿的耐藥性；如果能夠逆轉(zhuǎn)耐藥，是否與姜黃素對(duì)耐藥蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的表達(dá)和功能的影響有關(guān)。 方法：(1)

3、借助MTT、平板克隆形成和細(xì)胞周期分析確認(rèn)多藥耐藥胃癌細(xì)胞SGC7901/VCR相對(duì)于其親本細(xì)胞SGC7901對(duì)化療藥的耐藥性。(2)將不同濃度的姜黃素作用于SGC7901/VCR和SGC7901細(xì)胞，通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)，繪制細(xì)胞生存曲線，觀察姜黃素對(duì)兩種胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，篩選出對(duì)兩種胃癌細(xì)胞均無(wú)細(xì)胞毒性作用的安全劑量的姜黃素濃度范圍。 (3)將低劑量姜黃素與化療藥長(zhǎng)春新堿聯(lián)合作用于耐藥細(xì)胞SGC7901/VCR，利用MTT實(shí)驗(yàn)等

4、，觀察姜黃素能否逆轉(zhuǎn)SGC7901/VCR的耐藥性，提高該細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)春新堿的敏感度。(4)通過(guò)堿性磷酸酶免疫組織化學(xué)、熒光免疫組織化學(xué)、間接免疫熒光流式細(xì)胞儀檢測(cè)、RT-PCR和Westernblot實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)SGC7901和SGC7901/VCR細(xì)胞P-gp表達(dá)的差異；并觀察低劑量姜黃素處理SGC7901/VCR細(xì)胞，對(duì)多藥耐藥基因MDR1mRNA和P-gp表達(dá)的影響。(5)利用羅丹明123(Rh123)蓄積實(shí)驗(yàn)，借助流式細(xì)胞儀觀察姜黃

5、素對(duì)SGC7901/VCR細(xì)胞膜表面P-gp泵功能的影響。 結(jié)果：(1)長(zhǎng)春新堿對(duì)SGC7901細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率明顯高于SGC7901/VCR細(xì)胞；長(zhǎng)春新堿對(duì)SGC7901細(xì)胞的克隆形成率的抑制明顯強(qiáng)于SGC7901/VCR細(xì)胞；長(zhǎng)春新堿可以使SGC7901細(xì)胞發(fā)生明顯的G2/M期阻滯，而對(duì)SGC7901/VCR各時(shí)相細(xì)胞的比例沒(méi)有明顯的影響。 (2)在濃度篩選實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，SGC7901/VCR細(xì)胞對(duì)姜黃素不產(chǎn)生耐藥性，

6、0-25μmol/L姜黃素對(duì)兩種胃癌細(xì)胞均無(wú)細(xì)胞毒性作用。(3)低劑量姜黃素(0-25μmol/L)與長(zhǎng)春新堿聯(lián)合作用于耐藥細(xì)胞SGC7901/VCR，可以使細(xì)胞生存率和克隆形成率明顯降低，S期細(xì)胞(增殖期細(xì)胞)的比例明顯降低，G2/M期細(xì)胞的比例升高，出現(xiàn)G2/M期阻滯。(4)耐藥細(xì)胞SGC7901/VCR中多藥耐藥基因MDR1mRNA和膜表面P-gp的表達(dá)明顯高于其親本細(xì)胞SGC7901。用低劑量姜黃素處理SGC7901/VCR細(xì)胞

7、，多藥耐藥基因MDR1mRNA和P-gp的表達(dá)沒(méi)有明顯的變化。(5)Rh123蓄積實(shí)驗(yàn)表明低劑量姜黃素可以直接抑制P-gp的泵功能。 結(jié)論：(1)胃腺癌細(xì)胞系SGC7901/VCR相對(duì)于其親本細(xì)胞系SGC7901，確實(shí)對(duì)傳統(tǒng)化療藥長(zhǎng)春新堿產(chǎn)生明顯的耐藥性，SGC7901/VCR細(xì)胞可以認(rèn)為是一株多藥耐藥細(xì)胞。(2)SGC7901/VCR細(xì)胞對(duì)姜黃素不具有耐受的現(xiàn)象。(3)低劑量姜黃素可以逆轉(zhuǎn)SGC7901/VCR的耐藥性，提高該