吉西他濱體內(nèi)抗小鼠T細(xì)胞淋巴瘤生長(zhǎng)作用及相關(guān)藥敏機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　T細(xì)胞淋巴瘤(TCL)是一種來源于T淋巴細(xì)胞的惡性克隆增殖性疾病，異質(zhì)性強(qiáng)，臨床表現(xiàn)、診斷、治療因類型而異。TCL占所有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的5％～15％，地域性差別較大。目前對(duì)于TCL尚無統(tǒng)一的最佳治療方法。一直參照彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤進(jìn)行治療，但療效較差。盡快現(xiàn)在治療策略的不斷改善，誘導(dǎo)化療的廣泛應(yīng)用仍沒有明顯改變總的生存率，TCL患者的預(yù)后仍然較差，因此需要尋求新的藥物用于治療。
　　吉西他濱是嘧啶類抗代

2、謝藥物，屬于細(xì)胞周期特異性藥物，主要作用于DNA合成期，在一定條件下也可以阻止細(xì)胞從合成前期向合成期進(jìn)展。吉西他濱進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)被轉(zhuǎn)化為具有活性的吉西他濱磷酸鹽，影響DNA合成和修復(fù)，從而抑制腫瘤細(xì)胞分裂，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。目前吉西他濱在淋巴瘤的治療中的應(yīng)用逐漸增多，且相關(guān)的臨床實(shí)驗(yàn)也在增加，尤其是在T細(xì)胞淋巴瘤的治療中，但是由于不同個(gè)體間腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性差異較大，對(duì)化療藥物的敏感性差異亦大，使其治療療效差異較大。隨著藥物基因組學(xué)、

3、藥物遺傳學(xué)的發(fā)展，基因指導(dǎo)下個(gè)體化治療成為提高化療療效的有效途徑之一，但是有關(guān)吉西他濱在淋巴瘤治療中相關(guān)藥敏基因的研究報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)通過建立小鼠T細(xì)胞模型，給予吉西他濱化療治療，觀察其生存期并計(jì)算抑瘤率，了解其抗T細(xì)胞淋巴瘤生長(zhǎng)抑制作用，并應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)吉西他濱相關(guān)藥敏基因的表達(dá)，為吉西他濱應(yīng)用于臨床個(gè)體化治療，進(jìn)一步提高T細(xì)胞淋巴瘤的治療效果提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　目的：
　　本研究通過構(gòu)建小鼠T細(xì)胞淋巴瘤模型，應(yīng)

4、用吉西他濱、阿霉素、長(zhǎng)春新堿治療小鼠T細(xì)胞淋巴瘤，觀察吉西他濱抗體內(nèi)小鼠T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用，并檢測(cè)吉西他濱抗小鼠T細(xì)胞淋巴瘤的相關(guān)藥敏基因的表達(dá)，探討其相關(guān)機(jī)制，為吉西他濱應(yīng)用于T細(xì)胞淋巴瘤提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)及理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.選用C57BL/6小鼠建立小鼠T細(xì)胞淋巴瘤模型，并將60只小鼠隨機(jī)分6組為:吉西他濱高劑量組240mg/Kg;吉西他濱中劑量組120mg/Kg;吉西他濱低劑量組60mg/Kg;陽性

5、對(duì)照組ADM組5mg,/Kg;陽性對(duì)照組VCR組0.315mg/Kg;陰性對(duì)照組:注射無菌生理鹽水0.2ml只。均于小鼠接種后d8，d15，d22天腹腔注射給藥。觀察荷瘤鼠腫瘤生長(zhǎng)情況、體積和重量。并觀察小鼠的生存期。留取腫瘤組織標(biāo)本，制備HE染色瘤體組織切片，光鏡下觀察各實(shí)驗(yàn)組不瘤體組織病理形態(tài)學(xué)變化。
　　2.用熒光定量PCR檢測(cè)腫瘤組織標(biāo)本中RRM1、RRM2、DCK、Caspase-3、Mcl-1、MDR-1、MRP-1等

6、相關(guān)藥敏基因表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.吉西他濱高、中、低劑量組均有明顯的抗瘤作用，其抑瘤率分別為71.17％、51.21％、39.62％，平均瘤重為1.43、2.42、2.995g，明顯小于陰性對(duì)照組及陽性對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.吉西他濱高、中、低劑量組的平均生存時(shí)間(24.917±0.156)天、(24.833±0.123天)、(24.267±0.088)天，明顯長(zhǎng)于陰性對(duì)照組及陽

7、性對(duì)照組荷瘤鼠的平均生存時(shí)間，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.HE染色組織病理學(xué)觀察可見吉西他濱處理組有較多的腫瘤壞死區(qū)以及凋亡細(xì)胞。
　　4.Real-timePCR結(jié)果顯示:吉西他濱各組RRM1均明顯低于陰性、陽性對(duì)照組(P＜0.05)，RRM2、Caspase-3、DCK均高于陰性、陽性對(duì)照組(P＜0.05)，Mcl-1均低于陽性對(duì)照組(P＜0.05)，MDR-1、MRP-1吉西他濱各組與陽性對(duì)照組均有明

8、顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，而MRP-1與陰性對(duì)照組有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.通過建立小鼠T細(xì)胞淋巴瘤模型，從瘤體體積、抑瘤率、生存期觀察各組藥物抗腫瘤的作用，并通過腫瘤組織HE(蘇木精—伊紅)染色病理形態(tài)學(xué)，顯示了吉西他濱對(duì)鼠T淋巴瘤細(xì)胞EL-4具有明顯的體內(nèi)抑瘤效應(yīng)。
　　2.通過Real-timePCR檢測(cè)相關(guān)藥敏基因的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)了吉西他濱抗腫瘤作用與RRM1的降低及其他相關(guān)藥敏基