馬兜鈴酸誘導小鼠淋巴瘤細胞突變機制的研究.pdf

1、馬兜鈴酸存在于65種以上的馬兜鈴科植物中，其中有許多曾用于傳統(tǒng)中藥、食品補充劑或草藥療法減肥。近年來，人們發(fā)現(xiàn)馬兜鈴酸是一種對人和動物都有致突變性的強致癌劑。在之前的研究中，我們發(fā)現(xiàn)馬兜鈴酸是一種強致突變劑，對小鼠淋巴瘤細胞有顯著的細胞毒性和致突變作用。本研究中我們進一步闡明馬兜鈴酸(Aristolochic Acid, AA)的致突變分子機制，本試驗采用“小鼠淋巴瘤細胞L5178Y/TK+/-致突變檢測方法”（L5178Y/TK+/-

2、 Mouse Lymphoma Mutation Assay，MLA）來獲得胸苷激酶基因（tk）突變克隆。為了檢測含功能性tk基因的11號染色體（11b）上DNA斷裂情況，我們挑取對照組和100μg/ml AA處理小鼠淋巴瘤L5178Y tk+/--3.7.2-細胞得到的tk基因突變克隆，提取DNA，用基于PCR的雜合性缺失（Loss of heterozygosity，LOH）的分析方法考察11號染色體上分布的tk位點和其他三個微衛(wèi)星

3、位點（D11Mit42, D11Mit29, D11Mit74）的雜合性缺失情況。從檢測結(jié)果來看100μg/ml AA誘導的突變體中功能性tk基因缺失率為99％，其中所有的小克隆都失去了功能性tk基因，而大克隆的LOH發(fā)生率為96.6％。進一步分析了11號染色體上的分布的3個微衛(wèi)星位點（D11Mit42, D11Mit29, D11Mit74）的雜合性缺失狀況如下：6cm長度的DNA斷裂頻率為76％，38cm長度DNA即超過染色體一半長

4、度的DNA斷裂頻率為34％，整條染色體的缺失率為16％。這些都說明馬兜鈴酸是一種強染色體斷裂劑，能導致大范圍的DNA改變。另外我們發(fā)現(xiàn)大克隆在三個微衛(wèi)星位點（D11Mit42, D11Mit29, D11Mit74）上的LOH發(fā)生率分別是：88％，60％，24％；小克隆的分別為：64％，8％，8％，這說明在11b染色體上大克隆的染色體斷裂情況比小克隆的嚴重。這個結(jié)果與認為大片斷DNA損傷主要得到小克隆，點突變主要得到大克隆的假說不符。由