農(nóng)桿菌介導(dǎo)的GmWRKY70基因轉(zhuǎn)化大豆的研究.pdf

1、大豆是重要的經(jīng)濟(jì)和油料作物，也是植物蛋白、脂類(lèi)、礦物質(zhì)和維生素等物質(zhì)的天然資源，可供糧用、油用和飼用。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)糧食作物田間收益不斷增加，使得農(nóng)田收益較小的大豆種植面積進(jìn)一步萎縮，國(guó)內(nèi)大豆的供需均衡在一定程度上依賴(lài)國(guó)際市場(chǎng)，使我國(guó)面臨嚴(yán)重的產(chǎn)業(yè)危機(jī)。大豆在生長(zhǎng)過(guò)程中很容易受到逆境脅迫的影響，遭遇脅迫時(shí)產(chǎn)量往往會(huì)大幅度銳減乃至絕收，因此許多科研工作者運(yùn)用傳統(tǒng)育種方法和轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育新品種來(lái)增加大豆單產(chǎn)水平，同時(shí)運(yùn)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育抗逆新品

2、種使之適應(yīng)不同生長(zhǎng)環(huán)境（如鹽堿、低溫、凍害、干旱等），就可在保障主糧栽培區(qū)域不減少的情況下擴(kuò)大大豆栽培。這對(duì)增加農(nóng)民田間收益和國(guó)內(nèi)大豆產(chǎn)量、以及確保國(guó)家食品戰(zhàn)略安全等都意義重大。
　　以5種不同基因型大豆為試驗(yàn)材料，初步探索出耐鹽大豆的簡(jiǎn)易鑒定方法:在大豆植株長(zhǎng)至兩葉一心期時(shí)，分別進(jìn)行0、150 mmol/L鹽濃度處理，7d后進(jìn)行農(nóng)藝性狀觀察，其植株株高、植株地上部分生物量的相對(duì)差異以及鹽處理10d后的植株萎蔫率均可作為篩選耐鹽大

3、豆的主要參考指標(biāo)。
　　以大豆品種‘東農(nóng)50’為受體材料，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化法，將耐逆相關(guān)Gm WRKY70基因?qū)氲酱蠖够蚪M中，以期望獲得可以穩(wěn)定遺傳的抗旱耐鹽大豆新種質(zhì)。同時(shí)，對(duì)轉(zhuǎn)化得到的轉(zhuǎn)基因種質(zhì)，運(yùn)用反向PCR技術(shù)進(jìn)行T-DNA整合位點(diǎn)分析。主要結(jié)果如下;
　　1、農(nóng)桿菌介導(dǎo)的Gm WRKY70基因的遺傳轉(zhuǎn)化。以大豆品種‘東農(nóng)50’的子葉節(jié)為受體材料，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的子葉節(jié)法對(duì)植物表達(dá)載體pFGC5

4、941-Gm WRK Y70進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)基因株系L-05和L-08經(jīng)除草劑草丁膦噴施篩選、篩選標(biāo)記Bar基因的PCR檢測(cè)、目的基因GmWRKY70的PCR檢測(cè)、以及載體構(gòu)建特異性PCR檢測(cè)等，初步確定GmWRKY70已經(jīng)成功地整合到了大豆基因組中。
　　2、基于反向PCR技術(shù)的T-DNA整合位點(diǎn)分析。利用反向PCR技術(shù)對(duì)以上獲得的L-05和L-08兩個(gè)轉(zhuǎn)基因株系T-DNA整合位點(diǎn)側(cè)翼的大豆染色體上的未知序列進(jìn)行擴(kuò)增。序列對(duì)比分