腦震蕩對(duì)豚鼠耳蝸功能及螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的病理研究.pdf

1、目的：腦震蕩是頭顱外傷中較常見(jiàn)的一種，占顱腦損傷的80％，傷后患者除有腦震蕩的癥狀外，部分患者還伴有眩暈、耳鳴、耳聾等，因此腦震蕩后發(fā)生耳部癥狀的原因及病理改變?cè)絹?lái)越多地受到耳鼻咽喉科醫(yī)師的關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)采用單擺裝置制作豚鼠腦震蕩模型，觀察腦震蕩后不同時(shí)間段聽(tīng)性腦干反應(yīng)(auditory brainstem response，ABR)、畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射(distortion product oto-acoustic emissions，D

2、POAE)的變化以及耳蝸、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的病理改變，以探討腦震蕩后，聽(tīng)力學(xué)方面的病理變化，并為耳科聽(tīng)力學(xué)的診斷及法醫(yī)學(xué)鑒定提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：選用聽(tīng)力正常的白毛紅目豚鼠40只，體重為250-400g左右，雌雄不限，隨機(jī)分為A(正常對(duì)照組)、B(打擊后4周檢測(cè)組)、 C(打擊后6周檢測(cè)組)、 D(打擊后8周檢測(cè)組、)四組，每組動(dòng)物10只。利用單擺裝置建立豚鼠腦震蕩模型。聽(tīng)力學(xué)功能測(cè)試均在密閉隔聲室內(nèi)進(jìn)行。ABR測(cè)試：剃凈顱項(xiàng)正

3、中及鼻背部的毛，經(jīng)2％戊巴比妥鈉40-50mg/kg腹腔注射麻醉后，熱水袋維持肛溫在37.5-38.5℃。應(yīng)用日本三榮7S-12型誘發(fā)電位儀進(jìn)行聽(tīng)力測(cè)試，銀盤(pán)電極分別置于顱頂正中(記錄電極)，鼻背處(地電極)，雙耳廓(參考電極)。采用短聲刺激，刺激聲從90dB開(kāi)始，降至反應(yīng)波消失，以波Ⅲ出現(xiàn)的聲刺激強(qiáng)度作為該耳的反應(yīng)閾值，每次測(cè)試均重復(fù)兩次確定。DPOAE幅值檢測(cè)：2％戊巴比妥鈉40-50mg/kg腹腔注射麻醉后，通過(guò)自制的橡皮膠塞密閉

4、豚鼠的外耳道，將外界的聲源與其隔絕，并且將Smart OAE 4.41USBZDP-OAE型耳聲發(fā)射系統(tǒng)的聲源與接收器導(dǎo)入外耳道，兩純音的信號(hào)分別為f<,1>與f<,2>，他們的固定頻比為f<,2>/f<,1>=1.2；刺激聲強(qiáng)度為：L<,1>=65dB SPL,L<,2>=55 dB SPL；頻率范圍：以(F<,1>×F<,2>)<'1/2>=0.5、0.7、1、1.4、2、3、4、6、8kHz 9個(gè)頻率點(diǎn)處進(jìn)行測(cè)試，疊加200次，以

5、高于本底噪聲3 dB SPL為反應(yīng)出現(xiàn)的確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)前后均應(yīng)用ABR和DPOAE分別測(cè)試各組動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)后處死動(dòng)物，取出耳蝸，分別制作掃描電鏡、透射電鏡、光鏡標(biāo)本，并進(jìn)行觀察。記錄DPOAE幅值、ABR閾值及各波潛伏期，觀察耳蝸毛細(xì)胞及螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的病理變化。并應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析。 結(jié)果： 1 ABR測(cè)試結(jié)果ABR閾值：B組25.0±3.33dB、C組19.0±3．16dB和D組18.0±

6、3.50 dB分別與A組13.50±5.30 dB比較反應(yīng)閾值提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組之間除C組與D組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)外，其余各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。由此提示腦震蕩對(duì)聽(tīng)力有損害，并且在第四周聽(tīng)力損害達(dá)到最大。ABR各波潛伏期及波間期：B組與A組在波Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅰ-Ⅲ、Ⅰ-Ⅴ、Ⅲ-Ⅴ比較波潛伏期及波間期延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；C組與A組在波Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅰ

7、-Ⅴ、Ⅲ-Ⅴ比較波潛伏期和波間期延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；D組與A組在波Ⅲ、波Ⅰ-Ⅲ間期比較潛伏期及波間期延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。由此說(shuō)明腦震蕩對(duì)聽(tīng)覺(jué)腦干通路造成不同程度的損傷。 2 DPOAE幅值檢測(cè)結(jié)果B組與A組在頻率0.7、1、2kHz比較幅值降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；C組與A組在頻率2kHz比較幅值降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；D組與A組比較在頻率1、2kHz比較幅

8、值降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。因此腦震蕩對(duì)DPOAE幅值影響主要在頻率1和2kHz。 3 形態(tài)學(xué)結(jié)果 3．1光鏡觀察結(jié)果正常豚鼠耳蝸可見(jiàn)螺旋器隧道正常，外毛細(xì)胞排列整齊，刷狀緣清晰。實(shí)驗(yàn)B組螺旋器隧道增寬變形，毛細(xì)胞排列不整齊，刷狀緣不清晰；實(shí)驗(yàn)C組螺旋器隧道擠壓變形，毛細(xì)胞排列欠整齊；實(shí)驗(yàn)D組螺旋器及毛細(xì)胞未見(jiàn)明顯變化。 3．2掃描電鏡結(jié)果正常豚鼠耳蝸可見(jiàn)內(nèi)外毛細(xì)胞排列整齊，無(wú)缺失倒伏現(xiàn)象；實(shí)驗(yàn)

9、B組外毛細(xì)胞排列紊亂，缺失、倒伏現(xiàn)象嚴(yán)重，內(nèi)毛細(xì)胞倒伏；實(shí)驗(yàn)C、D組外毛細(xì)胞無(wú)明顯變化，內(nèi)毛細(xì)胞仍有倒伏現(xiàn)象。 3．3透射電鏡結(jié)果正常螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞核圓、核仁居中，線粒體無(wú)腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)均勻分布，溶酶體無(wú)腫脹溶解。實(shí)驗(yàn)組螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞有不同程度的受損，線粒體腫脹，空泡樣變，線粒體嵴消失或位于周邊，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張。 結(jié)論： 1 腦震蕩后豚鼠ABR與DPOAE兩項(xiàng)聽(tīng)力學(xué)檢測(cè)不同程度的異常，說(shuō)明腦震蕩對(duì)聽(tīng)覺(jué)腦干通路有不同