HO-1在UUO大鼠腎間質纖維化保護作用的研究.pdf

1、目的：腎間質纖維化是各種原因所致腎臟疾病進行性發(fā)展的共同病理特征。腎間質纖維化的程度與腎功能損害程度有很高的相關性，故常以間質纖維化作為評價腎臟疾病進展程度的可靠指標。血紅素氧合酶-1(haeme oxygenase-1，HO-1)廣泛分布于哺乳動物多種組織細胞的微粒體中，在腎臟中，它主要分布于腎皮質的近端、遠端小管及髓質的集合管上皮細胞內。近年來研究表明，它具有抗氧化、抗炎、抗調亡和改善微循環(huán)的作用，是對腎臟具有保護作用的一種細胞因子

2、。Otterbein[1]等發(fā)現(xiàn)，HO-1是通過抑制核轉錄因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的活性，下調單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1，MCP-1)，對腎臟具有保護作用。在近期的國外研究中[2]，也有體外試驗表明通過誘導HO-1表達增加，轉化生長因子-β1(transforming growthfactor,TGF-β1)表達減少，延緩腎間質纖維化的

3、進展。國內已有研究報道[3]，在5/6腎切除的大鼠模型中，誘導HO-1的表達，可明顯減輕慢性腎衰竭大鼠腎臟病理學損傷，延緩腎臟病變。但HO-1在單側輸尿管梗阻(unilateral ureteralobstruction，UUO)模型腎間質中的表達及其與TGF-β1、MCP-1的關系，國內外研究很少。本實驗擬通過輸尿管結扎造成腎間質纖維化，從細胞因子水平探討HO-1對腎臟的保護作用及其可能的機制。 方法：選擇健康雄性Wistar

4、大鼠54只，體重180-220克，隨機分為三組：假手術組(A組，n=18)，UUO組(B組，n=18)，氯化血紅素(Hemin)組(C組，11=18)。術后3、7、14天分批處死，又將每組隨機分為N3、N7、N14組，每組各6只。所有大鼠均在溫度(23±2)℃，相對濕度為(55±2)％下自由進食水。將各組大鼠以水合氯醛(0.1ml/kg)腹腔注射麻醉后，行左側恥骨上切口，沿左腎下極尋找到左側輸尿管，在中上1/3處用4號線上下結扎兩處，然

5、后從中間剪斷輸尿管，以防逆行性感染，建立單側輸尿管梗阻模型。假手術組僅游離輸尿管但不結扎。術后各組大鼠均正常進食水。Hemin組大鼠以Hemin混懸液50μg/(Kg·d、)灌胃給藥，1次/日；假手術組和UUO組大鼠用等量的生理鹽水灌胃, 1次/日。三組均于術前一天開始灌胃，并于術后第3、7、14天處死大鼠，迅速取出左腎，按冠狀位縱形切開，取腎組織的1/2置于4％多聚甲醛固定液固定和石蠟包埋，所有的組織被制成5μm切片。光鏡HE、Mas

6、son染色觀察腎臟病理變化。采用免疫組織化學染色測定腎小管間質HO-1、MCP-1、TGF-β1的表達，結果應用圖像分析系統(tǒng)進行半定量分析。實驗結果均以均數(shù)±標準差(x±s)表示，各組間比較采用單因素方差分析，應用SPSS 11.0統(tǒng)計分析軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。 結果：大體觀察，左側腎臟病理學改變：A組大鼠腎臟外觀正常，大小如黃豆。梗阻大鼠的患側腎臟體積隨梗阻時間的延長而逐漸增大，增大的腎臟內

7、可見明顯積水，積液清亮透明，腎皮質隨梗阻時間延長而逐漸變薄，腎盂擴張，腎盞乳頭受壓，穹隆部乳頭變平鈍，部分成凹形，乳頭萎縮。光鏡觀察，A組HE和Masson染色未見異常。B組術后3天腎小管輕度擴張，間質中少量單核細胞與淋巴細胞浸潤，腎間質寬度增加；B組7天可見腎小管擴張明顯，上皮細胞變性、水腫、甚至壞死，腎間質較多淋巴單核細胞浸潤，間質寬度明顯增加，偶見萎縮腎小管；B組14天上述病變加重，可見腎小管基底膜彌漫性增厚、皺縮、甚至斷裂，皮質

8、及外髓萎縮的腎小管較多，間質中大量淋巴單核細胞浸潤，纖維化較明顯。Masson染色顯示：在各個時相點，C組和B組。腎間質病變的程度較A組明顯增高(P＜0.05)，而C組與B組相比腎小管間質病變程度明顯減輕(P＜0.05)。免疫組化結果顯示：在假手術組，HO-1，MCP-1和TGF-β1均在腎小管上皮細胞中有極少量的表達；在B組和C中，隨著梗阻時間的延長，HO-1的表達均明顯降低，但這兩組各時相點HO-1的表達均明顯高于A組；與B組相比，

9、C組中HO-1的表達在各時相點明顯增高。B組和C組，3天時MCP-1表達較假手術組輕度增高，7天時表達至高峰，14天時表達減少；C組較B組同時相點MCP-1的表達均降低，但這兩組各時相點MCP-1的表達均明顯高于A組。B組和C組中，TGF-β1于各時相點隨梗阻時間延長，其表達量呈進行性升高，且隨著梗阻時間延長升高程度更加明顯，至第14天表達最強，C組較B組同時相點TGF-β1的表達均降低，但這兩組各時相點均明顯高于A組。除A組組內三種因