FFNT-5治療UUO模型大鼠腎纖維化實驗研究.pdf

1、第一章不同濃度FFNT-5對腎成纖維細胞增殖的影響研究
　　 背景:腎間質纖維化是由各種因為引起的細胞外基質成分在腎間質內(nèi)過度沉積,成纖維細胞是間質內(nèi)主要腎臟固有細胞之一,是腎間質纖維化過程中最主要的細胞外基質分泌細胞,因此,能否阻止腎組織纖維化進程關鍵在于能否阻斷腎成纖維細胞的過度增殖和分泌。腎間質纖維化的發(fā)生機制較為復雜、目前尚未完全闡明,可能與以下幾個方面有關:間質成纖維細胞增殖、活化和表型轉化；腎小管上皮細胞轉分化為肌成

2、纖維細胞；某些血管活性物質和細胞因子等對上述細胞生物學行為、細胞外基質產(chǎn)生及降解過程的影響；細胞外基質成分產(chǎn)生增多和(或)降解減少,最終導致腎間質細胞外基質積聚和纖維化?；谀I間質纖維化病理機制有多靶點與多環(huán)節(jié)的特點,研究和開發(fā)一種有效的抗纖維化藥物已成為全球腎臟病領域的熱點、難點之一。氟非尼酮(1-(3-氟苯基)-5-甲基-2-(1H)吡啶酮,fluorofenidone,AKF-PD)是由中南大學自主設計合成的一種新的吡啶酮類化合物

3、,已獲得國家發(fā)明專利,前期已在GLP實驗室證明其毒性低,在細胞實驗和動物實驗中已證實具有廣泛抗腎間質纖維化的作用；N-5是本研究組合成得到的一種新的小分子化合物,在前期抗腎纖維化藥物篩選實驗中我們初步發(fā)現(xiàn)FFNT-5可抑制腎成纖維細胞增長,因此我們在擬此基礎上來觀察不同濃度FFNT-5對腎成纖維細胞增殖的影響。
　　 目的:觀察FFNT-5對腎成纖維細胞增殖的影響。
　　 方法:采用噻唑藍(MTT)法檢測不同濃度的FFN

4、T-5對鼠腎成纖維細胞(BHK-21)增殖的影響。設立正常對照組、FFNT-5(100μg/ml)組、FFNT-5(200μg/ml)組、FFNT-5(400μg/ml)組、AKF-PD(100μg/ml)組、AKF-PD(200μg/ml)組及AKF-PD(400μg/ml)組,分別于不同時間點(24、48、72小時)用酶標儀檢測OD值并在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)及生長狀況。
　　 結果:不同濃度FFNT-5作用于鼠腎成纖維

5、細胞24h、48h、72h時均能明顯抑制細胞增殖,并呈一定的濃度依賴性,各時間點觀察細胞形態(tài)無明顯變化。
　　 結論:FFNT-5可明顯抑制鼠腎成纖維細胞的增殖。
　　 第二章不同劑量FFNT-5對UUO大鼠腎間質纖維化的治療效果的觀察研究
　　 背景:腎間質纖維化是各種慢性腎臟疾病發(fā)展至終末期腎衰竭的共同途徑和主要病理基礎；是在各種致病因子如損傷、炎癥、藥物、遺傳因素等的作用下,間質細胞及細胞間質增多,尤其是基

6、質蛋白合成增加、基質降解受抑制造成細胞外基質的大量堆積導致的腎小球硬化和小管間質的纖維化。積聚在腎間質的細胞外基質成分復雜,既包括正常腎間質已有的機制蛋白成分(Ⅰ、Ⅲ、纖連蛋白和腱蛋白等)的增多,還包括正常時僅存在于腎小管基膜的基質蛋白(Ⅳ型膠原和纖連蛋白等)的沉積。單側輸尿管梗阻(UUO)模型是目前研究腎間質纖維化經(jīng)典的實驗動物模型,通過結扎單側輸尿管引起腎臟引流系統(tǒng)的阻塞,導致急性腎臟功能的改變和慢性腎臟結構的損害,模擬臨床上常見的

7、輸尿管梗阻導致的腎間質損傷,且有操作簡單,易行,病變典型的特點。FFNT-5是本課題組合成得到的一種新的吡啶酮類化合物,前面的體外實驗中已證實它能明顯抑制腎成纖維細胞的增殖,并呈一定的濃度依賴性,對正常細胞無明顯影響,前期完成了急性毒性試驗研究,已在GLP實驗室證明其毒性低。因此FFNT-5在體內(nèi)能否影響腎組織中膠原的沉積達到抗。腎纖維化的作用值得更進一步研究。
　　 目的：觀察不同劑量FFNT-5對腎間質纖維化的治療效果。

8、r>　　 方法：將25只SD雄性大鼠隨機分為5組:假手術組、模型組、FFNT-562.5mg/kg組、FFNT-5125mg/kg組及AKF-PD125mg/kg治療組,每組各5只。除假手術組外,其他各組行單側輸尿管結扎術建立輸尿管梗阻模型,假手術組只分離術側輸尿管,不予結扎及離斷。UUO造模前1天起予以灌胃至術后13天,各治療組藥物均以0.5％CMCNa作為溶劑,FFNT-562.5mg/kg治療組給與FFNT-5溶液62.5mg/

9、kg/d灌胃、FFNT-5125mg/kg治療組給與FFNT-5溶液125mg/kg/d灌胃；AKF-PD治療組給與AKF-PD溶液125mg/kg/d灌胃；模型組和假手術組每天給與等體積0.5％CMCNa灌胃。術后14天處死動物,取各組大鼠的術側腎組織分別做HE和Masson染色,并用免疫組化方法檢測腎臟Ⅰ、Ⅲ膠原表達水平。
　　 結果：UUO術后14天,模型組大鼠腎間質損傷指數(shù)和腎間質纖維化程度較假手術組明顯升高(P＜0.0

10、001)；除FFNT-562.5mg/kg組外,余治療組與模型組相比損傷指數(shù)及纖維化程度均顯著下降(P＜0.0001),但仍高于假手術組(P＜0.05)；FFNT-5125mg/kg組療效弱于AKF-PD125mg/kg組(P＜0.05)；FFNT-562.5mg/kg至125mg/kg組隨著劑量的增大,腎間質損傷指數(shù)及間質纖維化程度逐步減低,呈劑量依賴性；模型組梗阻側腎組織Ⅰ、Ⅲ膠原表達顯著上調；FFNT-5藥物各治療組與模型組相比Ⅰ