重組七鰓鰻LIP分子對腫瘤細(xì)胞殺傷機(jī)制——基于細(xì)胞膜靶點(diǎn)的探究.pdf

1、七鰓鰻，原始的無頜類脊椎動物，位于無脊椎動物與脊椎動物之間，為生物的起源與進(jìn)化提供了豐富的遺傳信息并具有較高的研究價值。七鰓鰻所具有的獨(dú)特免疫系統(tǒng)，可變淋巴細(xì)胞受體VLR相關(guān)的免疫機(jī)制，為了解適應(yīng)性免疫系統(tǒng)提供了可靠依據(jù)。同時本實(shí)驗(yàn)室前期在七鰓鰻重要免疫器官神經(jīng)軸體中，發(fā)現(xiàn)具有細(xì)胞毒性的免疫分子LIP（lamprey immune protein），為研究抗腫瘤機(jī)制與適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的進(jìn)化取得了突破性進(jìn)展。
　　為進(jìn)一步揭示免疫分子

2、LIP殺傷腫瘤細(xì)胞的作用機(jī)制，本論文主要使用了小干擾RNA、實(shí)時定量PCR、乳酸脫氫酶細(xì)胞毒檢測、免疫熒光等方法，并結(jié)合了超高分辨顯微鏡與共聚焦顯微鏡等儀器。利用與天然七鰓鰻LIP相同蛋白活性的重組LIP分子，基于細(xì)胞膜表面系統(tǒng)，對細(xì)胞表面各種不同類型的受體分子進(jìn)行了相關(guān)探究。
　　研究發(fā)現(xiàn)重組LIP分子具有選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞（包括貼壁類與懸浮類）的特性，并以多聚體的形式作用于癌細(xì)胞細(xì)胞膜表面。為探究重組LIP分子的細(xì)胞受體，分別

3、對細(xì)胞膜上的磷脂分子、部分蛋白質(zhì)及脂筏微區(qū)各部分與重組LIP分子之間的關(guān)系進(jìn)行了詳細(xì)探究。結(jié)果表明一些常見細(xì)胞毒素的受體分子如CD59等均不作為重組LIP分子的識別受體，但細(xì)胞膜上三種重要的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白:磷脂爬行酶及依賴ATP的翻轉(zhuǎn)酶與移位酶調(diào)控了細(xì)胞膜表面的PS外翻，由于重組LIP分子與細(xì)胞膜上的PS具有結(jié)合作用，從而加劇了對癌細(xì)胞的殺傷。對于細(xì)胞膜上脂筏微區(qū)等相關(guān)結(jié)構(gòu)的探究中，發(fā)現(xiàn)當(dāng)使用特異性磷脂酰肌醇-磷脂酶C(PI-PLC)清除細(xì)胞

4、表面的糖基磷脂酰肌醇錨定蛋白(GPI-APs)后，可抑制重組LIP分子同細(xì)胞膜上脂筏的結(jié)合，從而有效抑制了對癌細(xì)胞的殺傷作用。隨后對參與GPI-APs的聚糖合成的催化元件探究中，結(jié)果顯示催化甘露糖與GPI錨連接的PIGN(GPI7的同系物)的沉默，有效減弱了重組LIP分子的殺傷活性，鑒于重組LIP分子具有凝集素結(jié)構(gòu)域，預(yù)測GPI-APs的聚糖部分可能介導(dǎo)了重組LIP分子的殺傷作用。
　　本實(shí)驗(yàn)室為首次探究重組七鰓鰻LIP分子的作用