利用CytoTrap酵母雙雜交方法篩選與PRDM1、PRDM14有相互作用的蛋白.pdf

1、目的：鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄抑制因子1和14（Prdm1、Prdm14）是PRDM家族中的兩個(gè)成員，在原始生殖細(xì)胞(primordialgermcell,PGC)的特化過(guò)程中具有重要作用。PRDM1能抑制體細(xì)胞分化基因表達(dá)；PRDM14不但可以調(diào)控PGC的特化而且使其具有誘導(dǎo)多能性。Blimp1（Prdm1）缺失的小鼠只能形成少數(shù)的PGC樣細(xì)胞，同時(shí)失去了遷移特性、增值和抑制HOX基因的功能；Prdm14缺失突變的小鼠，Sox2表達(dá)量下降，PGC

2、細(xì)胞沒(méi)有發(fā)生基因組表觀遺傳重編程現(xiàn)象。所以，尋找那些與PRDM1、PRDM14有相互作用的蛋白并研究它們之間的作用機(jī)制，將對(duì)深入了解PRDM1、PRDM14的功能及它們信號(hào)傳導(dǎo)途徑具有重要意義。本課題主旨在于使用CytoTrap酵母雙雜交方法從人脾cDNA文庫(kù)篩分別選出與PRDM1、PRDM14有相互作用的蛋白，為進(jìn)一步研究二者的功能、調(diào)控機(jī)制以及信號(hào)傳導(dǎo)途徑提供新的思路和理論依據(jù)。
　　方法：構(gòu)建Psos-hPRDM-Flag和

3、Psos-hPRDM14-Flag兩種重組質(zhì)粒，摸索了制備酵母cdc25H(α)感受態(tài)細(xì)胞的最佳條件并獲得了大量cdc25H(α)感受態(tài)細(xì)胞，通過(guò)梯度實(shí)驗(yàn)確定誘餌基因和文庫(kù)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)的使用量。利用CytoTrap酵母雙雜交篩庫(kù)的方法，分別以Psos-hPRDM1-Flag重組質(zhì)粒、Psos-hPRDM14-Flag重組質(zhì)粒為誘餌從人脾臟cDNA文庫(kù)中篩選出與其能夠發(fā)生相互作用的蛋白。
　　結(jié)果：利用CytoTrap酵母雙雜交系統(tǒng)從人