高速逆流色譜分離甘草和淡豆豉中主要黃酮成分的研究.pdf

1、高速逆流色譜是一種不用固態(tài)支撐體的液液分配色譜，具有分離速度快、樣品回收率高、成本低等優(yōu)點而被廣泛用于天然產(chǎn)物的分離純化中。本文概括介紹了高速逆流色譜的理論基礎(chǔ)、操作方法及其在天然產(chǎn)物活性成分分離中的應(yīng)用和發(fā)展現(xiàn)狀。歸納了高速逆流色譜分離中常用的溶劑體系，并對影響高速逆流色譜分離效果的因素進行總結(jié)。 甘草和淡豆豉是我國應(yīng)用歷史悠久的傳統(tǒng)中藥，被歷版《中國藥典》收錄。甘草中含有黃酮類、三萜類和生物堿類等多種活性成分，其中的甘草黃酮

2、被證明具有顯著的抗癌、抗氧化和抗病毒等生理藥理作用。 本研究中選用新疆產(chǎn)烏拉爾甘草，先采用熱水提取法除去甘草酸，再用溶劑萃取法得到甘草總黃酮樣品，對粗樣品中總黃酮含量用紫外分光光度法測定，并初步研究了該粗提物的體外活性作用。對甘草總黃酮樣品采用高速逆流色譜法進行分離純化，首先用分析型高速逆流色譜儀優(yōu)化溶劑體系，再采用半制備逆流色譜進行流速優(yōu)化和進樣濃度優(yōu)化，最后確定出TBE300A半制備逆流色譜儀分離甘草黃酮的最佳實驗條件：兩相

3、兩相溶劑系統(tǒng)：正己烷—乙酸乙酯—甲醇一水(1：2：1：1)，上相為固定相，下相為流動相，主機順時針方向旋轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速850r/min，流動相流速3.0ml/min，流動相洗脫方式為頭到尾洗脫，樣品濃度：20mg/ml，檢測波長260nm。實驗結(jié)果顯示，通過一次分離(耗時200min)，可從400mg甘草粗提物中得到甘草黃酮醇26mg，甘草素8mg，芒柄花素12mg，甘草異黃酮甲10mg，產(chǎn)物純度經(jīng)HPLC面積歸—法測定分別為96.3％，95

4、.7％，96.5％和96.8％，產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)熔點、UV、MS、<'1>H—NMR和<'13>C—NMR共同鑒定。 淡豆豉中的主要活性成分是大豆異黃酮，因其結(jié)構(gòu)和功能與雌激素相似，而表現(xiàn)出多種生理活性，現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于腫瘤、心血管疾病和骨質(zhì)疏松等重大疾病的預(yù)防和治療中。由于目前用高速逆流色譜分離大豆異黃酮的溶劑體系大多含有氯仿，本研究的目的正是通過溶劑系統(tǒng)優(yōu)化，采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇.水此低毒性溶劑系統(tǒng)代替?zhèn)鹘y(tǒng)采用的氯仿-甲醇-

5、水體系，并對進樣濃度和流速進行優(yōu)化，根據(jù)線性放大規(guī)則擬定出適合大型制備逆流色譜分離淡豆豉中主要黃酮成分的工藝條件。同時，我們用TBE300A半制備高速逆流色譜對淡豆豉樣品進行分離純化，實驗結(jié)果顯示：通過300min分離，從200mg淡豆豉粗提物中分離得到大豆素11mg，染料木黃酮6.8mg。產(chǎn)物純度經(jīng)HPLC面積歸一法確定分別為96.3％和93.7％，產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)<'1>H-N1VIR和<'13>C-NMR鑒定。半制備高速逆流色譜制備兩種