氨芐青霉素免疫原性分析及其抗體制備.pdf

1、氨芐青霉素（AMP）是β-內(nèi)酰胺類抗生素的一種，屬于半抗原，為廣譜抗生素;另外，AMP還具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的作用，因此在畜牧業(yè)養(yǎng)殖中常被用作飼料添加劑或用于動(dòng)物乳腺炎等疾病的防治，從而使動(dòng)物源性食品中含有超標(biāo)的AMP殘留,嚴(yán)重危害了人類健康。建立一種準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便的氨芐青霉素殘留檢測(cè)方法是十分必要的。
　　本研究首先通過(guò)制備高質(zhì)量的氨芐青霉素全抗原，免疫Balb/c小鼠，制備高親和力、高特異性的抗AMP單克隆抗體。在此基礎(chǔ)上，初步

2、建立氨芐青霉素ELISA檢測(cè)技術(shù)。
　　(1)首先采用生理學(xué)法、EDC法、戊二醛法、NHS+EDC法、BS3法和SMCC六種方法將AMP與BSA、OVA和KLH三種載體蛋白偶聯(lián)，合成完全抗原。采用紫外掃描法和SDS-PAGE凝膠電泳法對(duì)偶聯(lián)效果進(jìn)行了鑒定。
　　(2)將合成的抗原開(kāi)展免疫原性分析，其中③號(hào)小鼠血清效價(jià)達(dá)到了2×105，③號(hào)小鼠血清敏感性最好，其抑制率達(dá)到了86.2％。
　　選擇③號(hào)小鼠利用雜交瘤技術(shù)制備

3、單克隆抗體，共篩選出3株雜交瘤細(xì)胞株，分別為2C3、4E5和4C7。其中2C3雜交瘤細(xì)胞分泌抗體的性質(zhì)穩(wěn)定，效價(jià)也較高，用其制備腹水，大量制備單抗。純化后2C3單抗蛋白濃度為9.51mg/ml，腹水效價(jià)為4×105，亞型為IgG1，IC50值可達(dá)到9.3ng/ml，與載體蛋白BSA、KLH以及除青霉素類以外的抗生素均無(wú)交叉反應(yīng)。
　　(3)初步建立了間接ELISA方法檢測(cè)AMP的試驗(yàn)條件，靈敏度和最低檢測(cè)線分別為9.37ng/ml