Galectin-3在自發(fā)性高血壓大鼠心肌纖維化中的作用及機(jī)制.pdf

1、目的：觀察Galeetin-3和Spl在不同周齡SHR大鼠心肌中的表達(dá)模式，觀察外源Galectin-3干預(yù)對(duì)心臟成纖維細(xì)胞(Fb)分化、膠原合成、Spl表達(dá)的作用，以及Spl內(nèi)源性抑制對(duì)Galectin-3效應(yīng)的影響，探討Galectin-3在心肌纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用及可能機(jī)制，為心肌纖維化的基礎(chǔ)與臨床研究提供新思路。 方法：采用12、20、28周齡SHR，測(cè)量尾動(dòng)脈血壓，計(jì)算LVW/BW，取心肌組織用Masson法進(jìn)行膠原

2、染色，分析CVF及PVCA/LA，ELISA檢測(cè)大鼠血清PICP濃度，RT-PCR檢測(cè)Galectin-3mRNA表達(dá)，Western blot和免疫組化檢測(cè)Galectin-3蛋白表達(dá)，RT-PCR、Western blot檢測(cè)Spl的mRNA與蛋白表達(dá)。以同周齡WKY為對(duì)照，并比較不同周齡SHR之間上述指標(biāo)的差異。 原代培養(yǎng)大鼠心臟Fb，采用不同濃度(10、20、30、40μg/ml)Galectin-3干預(yù)24小時(shí)，RT-

3、PCR法檢測(cè)α-SMA、SplmRNA表達(dá)，Western blot檢測(cè)α-SMA、Spl的蛋白表達(dá)；收集培養(yǎng)上清，ELISA檢測(cè)PICP濃度。采用20μg/ml濃度Galectin-3干預(yù)Fb，檢測(cè)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)(6、12、24、48小時(shí))α-SMA、Spl的mRNA與蛋白質(zhì)水平，檢測(cè)培養(yǎng)上清PICP濃度。合成Spl反義寡核苷酸片段，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染心臟Fb抑制Spl表達(dá)(AS組)，以單純脂質(zhì)體處理組(Ctrl)和隨機(jī)寡核昔酸組(Inv)為對(duì)照

4、，給予Galectin-3干預(yù)，檢測(cè)Spl的mRNA與蛋白表達(dá)，檢測(cè)α-SMA的mRNA與蛋白表達(dá)，檢測(cè)培養(yǎng)上清PICP濃度。 結(jié)果：(1)12、20、28周齡SHR平均血壓值均顯著高于同周齡WKY；從12周齡至28周齡，SHR血壓持續(xù)升高，20周齡組顯著高于12周齡組，28周齡組顯著高于20周齡組。各周齡SHR的LVW/BW比值顯著高于同周齡WKY；SHR的LVW/BW比值隨周齡增加而增加，20周齡組顯著高于12周齡組，28周

5、齡組顯著高于20周齡組。組織學(xué)檢查顯示，20周齡SHR出現(xiàn)明顯的心肌間質(zhì)纖維化、血管周圍纖維化，28周齡SHR心肌局部可見(jiàn)纖維瘢痕，病變隨周齡的增加而加重。圖像分析顯示：20周齡、28周齡SHR的CVF與PVCA/LA顯著高于同周齡WKY；28周齡SHR的CVF與PVCA/LA顯著高于20周齡SHR，20周齡SHR顯著高于12周齡SHR。20周齡、28周齡SHR血清PICP顯著高于同周齡WKY；20周齡SHR血清PICP顯著高于12周齡

6、SHR，28周齡SHR顯著高于20周齡SHR。 (2)與正常同齡WKY大鼠比較，20周齡、28周齡SHR的Galectin-3 mRNA與蛋白表達(dá)明顯升高；20周齡SHR顯著高于12周齡SHR，28周齡SHR顯著20周齡組SHR。免疫組化染色顯示，20周齡SHR心肌間質(zhì)可見(jiàn)Galectin-3陽(yáng)性染色；28周齡時(shí)更加顯著，陽(yáng)性目標(biāo)面密度值顯著高于20周齡SHR。 (3)與正常同齡WKY大鼠比較，20周齡、28周齡SHR

7、SplmRNA與蛋白表達(dá)明顯升高；20周齡SHR顯著高于12周齡SHR，28周齡組顯著高于20周齡組。 (4)Galectin-3干預(yù)，自10μg/ml濃度起，α-SMA mRNA與蛋白表達(dá)明顯上升，呈劑量依賴趨勢(shì)；20μg/ml濃度Galectin-3干預(yù)Fb，12 h之后α-SMA的mRNA與蛋白表達(dá)均明顯上升，持續(xù)至48 h。 (5)Galectin-3干預(yù)，自20μg/ml濃度起培養(yǎng)上清中PICP濃度開(kāi)始明顯上升

8、，呈劑量依賴趨勢(shì)；20μg/ml濃度Galectin-3干預(yù)Fb，12 h起培養(yǎng)上清中PICP濃度明顯上升，持續(xù)至48 h。 (6)Galectin-3干預(yù)，自10μg/ml濃度起，Spl mRNA與蛋白表達(dá)明顯升高，呈劑量依賴趨勢(shì)；20μg/ml濃度Galectin-3干預(yù)Fb，12h起Spl mRNA和蛋白的表達(dá)明顯上升，持續(xù)至48 h。 (7)Galectin-3干預(yù)，Spl反義寡核苷酸(AS)組Spl mRNA、

9、蛋白表達(dá)較Ctrl和Inv組顯著降低；AS組α-SMA的mRNA、蛋白表達(dá)較Ctrl和Inv組顯著降低；AS組培養(yǎng)上清PICP濃度較Ctrl和Inv組顯著降低。 結(jié)論：(1)20周齡SHR出現(xiàn)明顯的心肌纖維化，28周齡時(shí)更加顯著。 (2)20周齡SHR心肌中Galectin-3表達(dá)升高，28周齡時(shí)進(jìn)一步升高，與SHR心肌纖維化嚴(yán)重程度一致。 (3)20周齡SHR心肌中Spl高表達(dá)，28周齡時(shí)更為顯著，與SHR心肌

10、纖維化嚴(yán)重程度及Galectin-3的變化趨勢(shì)一致。 (4)外源性Galectin-3促進(jìn)大鼠心肌Fb分化，α-SMA表達(dá)上調(diào)，作用呈時(shí)間、劑量依賴。 (5)外源性Galectin-3使大鼠心肌Fb膠原生成增加，作用呈時(shí)間、劑量依賴。 (6)外源性Galectin-3使大鼠心肌Fb的Spl表達(dá)增加，作用呈時(shí)間、劑量依賴。 (7)Spl反義寡核苷酸通過(guò)有效抑制Spl的內(nèi)源性表達(dá)，減輕了Galectin-3誘