自發(fā)性高血壓大鼠肥厚心肌和纖維化腎臟組織中microRNA-21的表達.pdf

1、目的：
　　 心血管疾病在發(fā)達國家長期以來一直是主要的死因，而且正快速變?yōu)榘l(fā)展中國家的頭號殺手。許多諸如高血壓，缺血性心臟病，血管疾病，和內(nèi)分泌紊亂的心血管疾病的常見的病理反應是心肌肥大。因此心肌肥大是心血管疾病致死率和病態(tài)的主要的一個決定因素。
　　 心臟的病理過程和對心臟功能重要的基因的表達譜有關(guān)，MicroRNAs是最近發(fā)現(xiàn)的一類調(diào)控基因表達的內(nèi)源性非編碼的小RNAs.它們的生物重要性，起初在癌癥，病毒疾病和發(fā)育過

2、程被證實，最近在心血管生理和病理方面更多的被調(diào)查
　　 在心臟方面，microRNAs單獨或者聯(lián)合的錯誤表達影響細胞結(jié)局，調(diào)節(jié)細胞增長和分化之間的平衡，并且誘導或者影響心臟疾病狀態(tài)，諸如肥大，纖維化，電重塑和心律失常。
　　 好幾種MicroRNAs的上調(diào)或者下調(diào)與嚙齒類和人類病理性的心臟重塑有關(guān)，其中miR-1，miR-195，miR-21，miR-133和心臟增長方面的作用有關(guān)。研究最熱的是MiR-21。許多研究得出

3、一致性的結(jié)果MiR-21在肥大心臟中的表達上調(diào)。
　　 本研究應用病理切片染色、real-time PCR等技術(shù)觀察SHR大鼠和Wistar大鼠心臟及腎臟組織中miR-21的表達情況，探討miR-21在高血壓致左室肥厚及腎臟纖維化中的作用。
　　 方法：
　　 一、模型制備
　　 選擇10只11周齡雄性SPF級自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）作為實驗組，年齡性別相配的10只SPF級Wistar大鼠為對照組。所有

4、大鼠均適應性飼養(yǎng)一周，后實驗組大鼠予以0.45％的氯化鈉溶液飼養(yǎng)三周，對照組大鼠正常飲用自來水。所有大鼠均于飼養(yǎng)四周后處死。立即取腎臟及左室心肌組織于-80℃凍存?zhèn)溆谩?br>　　 二、心臟肥大和腎臟纖維化的評估
　　 通過心臟大小的組織病理學的分析，左心室重量指數(shù)（LNMI）即左心室重與體重的比值（LVW：BW）來評估心肌肥大。通過組織病理學的分析來評估腎臟纖維化。
　　 三、miRNA檢測
　　 1、提取m

5、iRNA
　　 2、檢測miRNA.溶液濃度和純度（OD260/280）。
　　 3、加Poly（A）尾
　　 4、反轉(zhuǎn)錄
　　 5、PCR反應
　　 結(jié)果：
　　 1、心肌肥大和腎臟纖維化的鑒定
　　 計算出兩組左心室重量指數(shù)（LVMI），實驗組LNMI高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 所有實驗動物均于15周齡時處死，同時病理檢測其心肌組織及腎臟組織病理改變。光鏡下可

6、見，實驗組左室心肌細胞明顯肥大，左室心肌及腎臟近髓皮質(zhì)部組織顯著纖維化改變。對照組左室心肌細胞未見肥大的改變，心肌纖維化和腎臟纖維化程度較輕。
　　 2、肥大心臟和纖維化腎臟microRNA-21的表達
　　 實驗組大鼠microRNA-21在左室心肌和腎臟近髓皮質(zhì)部組織的表達均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論：
　　 在SHR大鼠肥大的左心室和纖維化的腎臟近髓皮質(zhì)部組織中miR-21是相對高度