瘦素對滋養(yǎng)細胞侵襲能力和內(nèi)皮細胞損傷的影響及與子癇前期關系的研究.pdf

1、本研究分為四部分：
　　 第一部分：瘦素在正常妊娠與子癇前期患者血清及胎盤組織中的表達的研究
　　 目的: 1. 研究正常妊娠及子癇前期患者血清及胎盤組織中瘦素蛋白及mRNA表達差異，探討瘦素與子癇前期的關系。
　　 2.檢測TNF－α和脂聯(lián)素在正常妊娠及子癇前期患者血清及胎盤組織中的表達，探討它們與瘦素在子癇前期發(fā)病機制中的相關性。
　　 方法: 1. 采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）定量檢測24例正常

2、妊娠及44例子癇前期患者血清中瘦素、TNF－α及脂聯(lián)素的表達水平。
　　 2. 采用伊紅－蘇木素（HE）染色，光鏡下觀察正常妊娠胎盤與子癇前期患者胎盤結構的病理學改變，用免疫組織化學法半定量檢測21例正常妊娠及55例子癇前期患者胎盤組織中瘦素、TNF－α及脂聯(lián)素的蛋白表達。
　　 3. 采用逆轉錄聚合酶鏈反應（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）分

3、別檢測10例正常足月妊娠及20例子癇前期患者（其中輕度10例，重度10例）的胎盤組織中瘦素和脂聯(lián)素的mRNA表達水平。
　　 結果: 1. 輕度及重度子癇前期患者瘦素血清水平均明顯高于正常孕婦，重度組脂聯(lián)素水平明顯低于正常組，而TNF-α水平明顯高于正常組；且重度組中瘦素與TNF－α呈正相關，脂聯(lián)素與TNF－α成負相關。
　　 2. 妊娠時胎盤中瘦素主要分布于滋養(yǎng)細胞胞膜、胞漿及核膜上。子癇前期胎盤中瘦素蛋白表達較正常妊

4、娠顯著升高，而脂聯(lián)素蛋白表達較正常妊娠明顯降低，重度子癇前期組中瘦素與TNF－α表達呈正相關。
　　 3. 正常妊娠胎盤中瘦素與脂聯(lián)素mRNA的表達量分別為0.564±0.336、1.610±0.528，而子癇前期胎盤中瘦素的表達量明顯增加，輕度組為0.778±0.175，重度組為1.174±0.556；與之相反地，脂聯(lián)素的表達量明顯下降，輕度組為1.363±0.475，重度組為0.636±0.218。且隨著病情的加重，瘦素表達

5、量的升高，脂聯(lián)素表現(xiàn)出明顯的下降趨勢。
　　 結論:瘦素表達增高與子癇前期密切相關，其他脂肪細胞因子如TNF－α和脂聯(lián)素與瘦素之間的相互作用相互影響，可能是其參與子癇前期發(fā)病重要機制之一。
　　 第二部分：瘦素在滋養(yǎng)細胞中的表達及對滋養(yǎng)細胞增殖和分泌功能的影響
　　 目的: 1. 研究缺氧對人早孕絨毛滋養(yǎng)細胞株（TEV－1）瘦素及脂聯(lián)素表達的影響，從細胞水平探討瘦素及其他脂肪細胞因子與子癇前期的關系。
　　

6、 2. 研究缺氧、重組人leptin蛋白和TNF－α蛋白對滋養(yǎng)細胞株增殖及分泌功能的影響，深入研究其對滋養(yǎng)細胞生物學特性的調控作用。
　　 方法: 1. 利用二氯化鈷誘導滋養(yǎng)細胞化學缺氧，模擬體外缺氧環(huán)境，采用逆轉錄聚合酶鏈反應（reverse transcription polymerasechain reaction，RT-PCR）檢測瘦素和脂聯(lián)素的基因表達。
　　 2. 利用二氯化鈷、不同濃度的重組人leptin

7、溶液和TNF－α溶液在體外分別干預滋養(yǎng)細胞生長，采用熒光定量PCR檢測瘦素的基因表達，噻唑蘭（Methl thiazolyl tetrazolium，MTT）比色法測定缺氧、leptin和TNF－α對滋養(yǎng)細胞增殖的影響。
　　 結果: 1. 隨著缺氧時間的增加，滋養(yǎng)細胞瘦素mRNA表達逐漸增加，至12h達峰值，且與正常培養(yǎng)相比瘦素表達量顯著升高，此后逐漸下降；隨著缺氧時間的延長，滋養(yǎng)細胞脂聯(lián)素mRNA表達逐漸減少，至12h時與正

8、常培養(yǎng)相比脂聯(lián)素表達量明顯降低，此后逐漸下降。
　　 2. 終濃度為5ng/ml瘦素和不同濃度的TNF－α均可顯著促進滋養(yǎng)細胞leptin mRNA的表達，干預時間對此作用無明顯影響。
　　 3.缺氧抑制了滋養(yǎng)細胞的增殖，且24h時抑制最為明顯；瘦素干預滋養(yǎng)細胞24h后，且終濃度為10ng/ml的瘦素抑制作用最為明顯；而TNF－α對滋養(yǎng)細胞增殖無明顯影響。
　　 結論:子癇前期中瘦素表達的增加與脂聯(lián)素減少與滋養(yǎng)細

9、胞缺氧是密切相關的。體外缺氧可誘導滋養(yǎng)細胞發(fā)生類似子癇前期的改變。另外，TNF－α可促進滋養(yǎng)細胞分泌瘦素，并且小劑量瘦素對滋養(yǎng)細胞瘦素的自分泌起到正反饋調節(jié)作用。
　　 第三部分：瘦素、TNF-á和缺氧對滋養(yǎng)細胞侵襲能力影響的研究
　　 目的:研究缺氧、重組人leptin蛋白和TNF－α蛋白對滋養(yǎng)細胞株侵襲功能的影響，進一步研究其對滋養(yǎng)細胞生物學特性的調控及其在子癇前期發(fā)病中的機制。
　　 方法:利用二氯化鈷、不

10、同濃度的重組人leptin溶液和TNF－α溶液在體外分別干預滋養(yǎng)細胞生長，采用Transwell體外侵襲實驗檢測缺氧、leptin和TNF－α對滋養(yǎng)細胞侵襲能力的影響。
　　 結果:缺氧抑制了滋養(yǎng)細胞的侵襲，且缺氧24h時抑制作用最顯著；瘦素可促進滋養(yǎng)細胞的侵襲，且隨著瘦素濃度的增高，滋養(yǎng)細胞的侵襲越顯著；TNF－α也可促進滋養(yǎng)細胞侵襲，但其作用與濃度無關。
　　 結論:體外培養(yǎng)時缺氧條件下滋養(yǎng)細胞的侵襲是受到抑制的，而

11、瘦素及TNF－α均可促進滋養(yǎng)細胞侵襲，這是它們引起子癇前期發(fā)病的機制之一。
　　 第四部分：瘦素在內(nèi)皮細胞中的表達及對內(nèi)皮細胞損傷的影響
　　 目的:1. 研究缺氧對人臍靜脈內(nèi)皮細胞株（VEC304）瘦素表達的影響，從細胞水平探討瘦素在內(nèi)皮細胞損傷方面與子癇前期的關系。
　　 2. 研究缺氧、重組人leptin蛋白和TNF－α蛋白對內(nèi)皮細胞株增殖及分泌功能的影響，深入研究胎盤源性毒性因子在內(nèi)皮細胞損傷中的作用。<

12、br>　　 方法: 1. 利用二氯化鈷誘導內(nèi)皮細胞化學缺氧，模擬體外缺氧環(huán)境，采用逆轉錄聚合酶鏈反應（reverse transcription polymerasechain reaction，RT-PCR）檢測瘦素基因的表達。
　　 2. 利用二氯化鈷、不同濃度的重組人leptin溶液和TNF－α溶液在體外分別干預內(nèi)皮細胞生長，采用熒光定量PCR檢測瘦素的基因表達，噻唑蘭（Methl thiazolyl tetrazoli

13、um，MTT）比色法測定缺氧、leptin和TNF－α對內(nèi)皮細胞增殖的影響。
　　 結果: 1. 隨著缺氧時間的增加，內(nèi)皮細胞瘦素mRNA表達量逐漸降低，但仍高于同期對照組，培養(yǎng)24h時卻明顯低于同期正常對照，此后逐漸下降。
　　 2. 終濃度為5ng/ml瘦素和不同濃度的TNF－α均可顯著促進內(nèi)皮細胞leptin mRNA的表達，干預時間對此作用無明顯影響。
　　 3. 缺氧抑制了內(nèi)皮細胞的增殖，且48h時抑制