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文檔簡介
1、本文利用生物信息學方法,對華支睪吸蟲cDNA文庫的EST序列進行同源性比對、序列拼接及基因完整性判斷后,篩選出鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶B亞基樣蛋白(calcineurin B-like protein,CBLP)基因.主要工作有以下內(nèi)容:1 CBLP的篩選與生物信息學分析 對華支睪吸蟲成蟲cDNA文庫的EST序列中有3'端測序結(jié)果的基因序列進行拼接,經(jīng)同源性分析,CsCBLP與褐家鼠CaN同一性53﹪,與尾刺耐格里原蟲CaN B同一性40﹪,與新
2、小桿線蟲屬結(jié)合蛋白的同一性51﹪,選擇CsCBLP,進一步研究其生物學功能.2 克隆及鑒定 將CsCBLP基因克隆入高效表達載體pGEX-4T-1,經(jīng)酶切及測序鑒定,重組pGEX-CsCBLP質(zhì)粒正確.3 重組蛋白表達、純化 工程菌BL21(DE3)/pGEX-CsCBLP經(jīng)IPTG誘導3~4小時,對表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE分析.4 蛋白酶切重組CsCBLP用thrombin蛋白酶對經(jīng)GST親合層析柱純化的融合蛋白GST-CsCBL
3、P酶切,PBS洗脫.用此純化的蛋白進行生物學活性實驗.5 rCsCBLP生物學活性分析本文通過生物信息學方法從華支睪吸蟲成蟲cDNA文庫中篩選出鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶B亞基樣蛋白CBLP,將CsCBLP基因克隆、表達,并對其生物學活性及在華支睪吸蟲成蟲的組織分布進行了研究.結(jié)果證實,rCsCBLP具有鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶B亞基的鈣結(jié)合活性,且CsCBLP基因主要分布于華支睪吸蟲成蟲的3生殖腺.結(jié)果提示,CsCBLP可能與華支睪吸蟲成蟲的生殖有關(guān).由此
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