展示的白色念珠菌熱休克蛋白90特異表位的雜合噬菌體抗系統(tǒng)性白色念珠菌感染的免疫保護(hù)作用研究.pdf

1、白色念珠菌是寄生在健康宿主皮膚、粘膜的條件致病菌，它可以作為機(jī)會(huì)病原體在人體免疫能力下降和正常菌群失調(diào)時(shí)，引起淺層感染和系統(tǒng)感染。近年來(lái)，隨著因治療擴(kuò)散性腫瘤以及免疫抑制劑的應(yīng)用而引起的免疫缺陷患者日益增多，系統(tǒng)性白色念珠菌感染的發(fā)病率明顯升高，它的危害性極大，死亡率非常高。白色念珠菌得不到控制的主要原因是缺乏有效的早期診斷、治療和預(yù)防的方法。臨床上依賴于傳統(tǒng)的血培養(yǎng)的方法診斷該類疾病，但存在著檢出率低，敏感性差和診斷過(guò)程時(shí)間長(zhǎng)的問(wèn)題。

2、臨床上采用多粘菌素B和吡唑類化學(xué)藥物對(duì)患者進(jìn)行治療，但是耐藥性的病例在不斷增加。為了防止其復(fù)發(fā)，也延長(zhǎng)了治療的周期，但存在著明顯的副作用。所以早期檢測(cè)出白色念珠菌的感染，在患者進(jìn)入免疫抑制狀態(tài)前通過(guò)疫苗來(lái)增強(qiáng)機(jī)體免疫力具有重要意義。
　　本研究是利用展示有白色念珠菌熱休克蛋白90(HSP90)特異表位(DEPAGE)的雜合噬菌體（以下簡(jiǎn)稱SE-CA-HSP90）作為抗原進(jìn)行抗系統(tǒng)性白色念珠菌感染的免疫保護(hù)作用的研究，以期為真菌預(yù)防

3、性疫苗的開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)包括以下內(nèi)容:
　　1大量制備雜合噬菌體SE-CA-HSP90
　　在野生噬菌體的幫助下，將含有編碼白色念珠菌HSP90特異表位(DEPAGE) DNA序列的pfd8H載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌TGl，轉(zhuǎn)化pfd8H的大腸桿菌成功地分泌表達(dá)出展示有DEPAGE表位的雜合噬菌體，再用PEG6000回收和純化培養(yǎng)液中的噬菌體粒子。雜合噬菌體樣品經(jīng)SDS-PAGE電泳后，在凝膠上可見(jiàn)有一條融合蛋白帶，明顯滯后于野

4、生型噬菌體外殼蛋白帶，采用敏感性較高的銀染色方法染色，未見(jiàn)其它雜蛋白帶，說(shuō)明達(dá)到純化要求。
　　2雜合噬菌體SE-CA-HSP90抗系統(tǒng)性白色念珠菌免疫保護(hù)研究
　　(1)建立系統(tǒng)性白色念珠菌感染模型，并篩選最佳感染劑量;
　　(2)以雜合噬菌體SE-CA-HSP90為抗原免疫C57BL/6小鼠，同時(shí)注射野生型噬菌體和緩沖液TE作為對(duì)照組。數(shù)周后尾靜脈進(jìn)行系統(tǒng)性白色念珠菌感染;
　　(3)不同時(shí)期進(jìn)行下列指標(biāo)的觀

5、察和檢測(cè):
　　(>)系統(tǒng)性白色念珠菌感染15天內(nèi)動(dòng)物死亡率的統(tǒng)計(jì);
　　(>)感染15天后，將免疫動(dòng)物的腎臟研磨成勻漿，在沙堡氏培養(yǎng)基中培養(yǎng)白色念珠菌，檢測(cè)白色念珠菌菌落數(shù)的變化;
　　(>)制作組織病理切片，進(jìn)行動(dòng)物腎臟受損情況的對(duì)比。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明免疫雜合噬菌體SE-CA-HSP90組，與免疫野生噬菌體組和注射TE組相比，對(duì)系統(tǒng)性白色念珠菌感染的抵抗力增加，表現(xiàn)在小鼠的存活率增加，寄居在腎中的白色念珠菌