柿鞣質(zhì)水提取物對(duì)白色念珠菌耐藥基因的作用.pdf

1、我國(guó)是世界上柿樹(shù)的主產(chǎn)及原產(chǎn)國(guó)。柿果是我國(guó)的第五大時(shí)令水果，產(chǎn)量和栽培面積都很可觀。柿子具有多種功能，包括降血壓、解酒、解蛇毒、抗癌及抗病毒等。醫(yī)學(xué)研究和現(xiàn)代食品表明柿果實(shí)含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，而其主要的功效部分為鞣質(zhì)。鞣質(zhì)是一種廣泛存在于植物界中的一類(lèi)分子量較大的復(fù)雜多元酚類(lèi)化合物，能與蛋白質(zhì)、生物堿結(jié)合。鞣質(zhì)具有的收斂止血、抗菌、保護(hù)粘膜等作用已被研究證實(shí)。隨著對(duì)鞣質(zhì)結(jié)構(gòu)及化學(xué)成分的研究，越來(lái)越多的國(guó)內(nèi)外學(xué)者致力于探討其在臨床疾病中的

2、作用。
　　白色念珠菌病是臨床上真菌感染的常見(jiàn)疾病。近年來(lái)，由于濫用廣譜抗生素、放療、化療以及免疫抑制劑的應(yīng)用，以及越來(lái)越多的口腔義齒、支架、靜脈插管、器官的移植等的應(yīng)用，導(dǎo)致口腔白色念珠菌病的發(fā)生率越來(lái)越高。而隨著抗真菌藥物的使用，致使耐藥菌株的產(chǎn)生，口腔的健康微生態(tài)環(huán)境遭到破壞，從而加大了治療白色念珠菌病的難度。從天然植物中提取有效成分來(lái)治療白色念珠菌病成為新的研究趨勢(shì)。中草藥在抗真菌方面的有著很大的優(yōu)勢(shì)，其在抗真菌感染的同時(shí)

3、可以調(diào)節(jié)免疫力，且不良反應(yīng)較少，不易產(chǎn)生耐藥性。鞣質(zhì)因其強(qiáng)大的功效成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者的主要研究對(duì)象，因此通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究柿鞣質(zhì)水提取物對(duì)口腔白色念珠菌的抑制作用，對(duì)治療白色念珠菌病具有積極作用。
　　目的:
　　我國(guó)有很豐富的柿子資源，醫(yī)學(xué)研究和現(xiàn)代食品指明柿果實(shí)具有重要的保健價(jià)值，鞣質(zhì)已被證實(shí)為而其主要藥效成分。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)柿鞣質(zhì)的研究越來(lái)越多，本研究對(duì)不同品種柿果實(shí)的鞣質(zhì)含量進(jìn)行比較，為柿鞣質(zhì)在口腔領(lǐng)域的應(yīng)用提供依據(jù)，對(duì)柿鞣質(zhì)的

4、研究和探索起到積極作用。
　　隨著白色念珠菌病的發(fā)生率越來(lái)越高，而其耐藥性的產(chǎn)生又增加了治療的困難，因此尋找耐藥性小，毒副作用少的抗真菌藥物成為必然趨勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)體外研究了柿鞣質(zhì)水提取液對(duì)白色念珠菌的抑菌作用及其對(duì)耐藥基因CDR1表達(dá)的影響。此研究為抗真菌感染藥物的研究提供新的方向，為臨床合理選擇用藥提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　1、柿果實(shí)鞣質(zhì)的提取:分別對(duì)蓋柿、牛心柿、大磨盤(pán)柿的全柿果實(shí)打碎研磨，乙醇浸泡后進(jìn)行超聲提

5、取，濃縮液經(jīng)蒸餾水稀釋?zhuān)珹B-8大孔樹(shù)脂吸附除糖，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，使用聚砜中空纖維超濾膜超濾，獲得的柿鞣質(zhì)溶液的分子量為10000，利用Folin-Denis法測(cè)定其鞣質(zhì)的含量，比較不同品種柿果實(shí)鞣質(zhì)含量的差異。
　　2、全柿果實(shí)鞣質(zhì)水提取液對(duì)白色念珠菌的體外抑菌實(shí)驗(yàn):采用改良液體二倍稀釋法，可檢測(cè)柿鞣質(zhì)水提取液對(duì)白色念珠菌的最小抑菌濃度，另外采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)方法檢測(cè)白色念珠菌耐藥基因CDR1在不同藥物濃度用藥后的表達(dá)水平。

6、>　　結(jié)果:
　　1、鞣質(zhì)對(duì)照品溶液在1.6×10-3 mg/mL～7.2×10-3mg/mL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，其標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=39.583x+0.013，相關(guān)系數(shù)R2=0.994。其中每克蓋柿鞣質(zhì)含量為202±3.6mg，每克牛心柿鞣質(zhì)含量為73±2.4mg，每克大磨盤(pán)柿鞣質(zhì)含量為52±3.0mg。
　　2、柿鞣質(zhì)水提取液對(duì)白色念珠菌的最低抑菌濃度為0.1159 mg/mL;伴隨著藥物濃度梯度的增加，白色念珠菌相