纖溶酶菌株的篩選及酶的分離純化.pdf

1、心腦血管疾病嚴(yán)重危害人們的健康，腦血栓、腦溢血、急性心肌梗死（AMI）已成為人類死亡的主要原因之一。利用纖維蛋白溶解酶（纖溶酶）溶解血栓，使血管再通是目前防治此類疾病的有效手段。微生物是溶栓藥物的重要來(lái)源，應(yīng)用微生物技術(shù)生產(chǎn)纖溶酶具有周期短、產(chǎn)量高、生產(chǎn)成本低等特點(diǎn)，是生物醫(yī)藥發(fā)展的一個(gè)重要方向。本實(shí)驗(yàn)在產(chǎn)纖溶酶菌株的篩選、菌種鑒定、發(fā)酵條件的優(yōu)化及酶的分離純化等方面進(jìn)行了研究。
　　 從屠宰場(chǎng)采集了土樣、凍干的豬血粉，市場(chǎng)上購(gòu)

2、買(mǎi)的豆豉，采用以血粉為主要基質(zhì)的富集培養(yǎng)基和纖維蛋白平板測(cè)活性相結(jié)合的方法進(jìn)行初篩，篩選到具有溶纖活性的菌株30株，其中來(lái)自土壤的12株，豆豉10株，豬血粉8株。
　　 選擇與已報(bào)道的產(chǎn)纖溶酶菌株菌落特征有明顯差異的兩株菌株，分別從菌落形態(tài)特征、生理生化等方面進(jìn)行了研究，鑒定34號(hào)菌株為革蘭氏陽(yáng)性球菌，動(dòng)性球菌屬（Planococcus），37號(hào)菌株為放線菌（Actinomyces）。
　　 對(duì)37號(hào)菌株產(chǎn)纖溶酶液體發(fā)酵

3、條件進(jìn)行了優(yōu)化，認(rèn)為：以淀粉為碳源，蛋白胨為氮源，接種量8％，裝液量為80ml/250 ml三角瓶，pH7.4，發(fā)酵溫度37℃，發(fā)酵48～72h時(shí)產(chǎn)酶最多，酶活性最高。
　　 利用硫酸銨沉淀纖溶酶蛋白，用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)蛋白濃度，對(duì)34、37號(hào)菌株的粗蛋白進(jìn)行了酶活性測(cè)定，其酶比活力分別達(dá)到90.5U/mg、624U/mg。利用陰離子交換樹(shù)脂DEAE-sephedex A-50對(duì)硫酸銨沉淀的纖溶酶進(jìn)一步純化，純化后34、37號(hào)菌株