BH3-only蛋白BIM與紫杉醇誘導(dǎo)的胃腺癌細(xì)胞凋亡的關(guān)系.pdf

1、背景及目的：腫瘤細(xì)胞的一個(gè)基本特征是細(xì)胞增殖與細(xì)胞凋亡的不平衡，而化療藥物殺死腫瘤細(xì)胞的主要機(jī)制就是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。胃腺癌對(duì)化療藥物不敏感，這主要是由于胃腺癌細(xì)胞對(duì)細(xì)胞凋亡的抵抗。Bcl-2家族中BH3-only蛋白在線粒體調(diào)節(jié)的“內(nèi)源性凋亡途徑”中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，被稱為“凋亡增敏蛋白”。其中，微管相連蛋白Bim被認(rèn)為在抗微管化療藥物誘導(dǎo)的乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌等多種腫瘤細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。本研究旨在通過(guò)探索抗微管化療藥物紫杉

2、醇體外誘導(dǎo)胃腺癌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制，并進(jìn)一步探討B(tài)im在決定胃腺癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇誘導(dǎo)其凋亡的敏感性中的潛在作用，更好地了解胃腺癌細(xì)胞對(duì)抗微管化療藥物抵抗的生物學(xué)基礎(chǔ)，以尋找克服腫瘤細(xì)胞對(duì)凋亡抵抗的有效途徑。 方法：采用不同濃度的紫杉醇不同時(shí)間處理體外培養(yǎng)的SGC-7901、BGC-823胃腺癌細(xì)胞。AnnexinV染色流式細(xì)胞儀檢測(cè)紫杉醇誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡水平；采用廣譜caspase抑制劑Z-VAD-fmk檢測(cè)caspases在紫杉醇

3、誘導(dǎo)的胃腺癌細(xì)胞凋亡中的作用；半定量RT-PCR和Westernblot分別檢測(cè)在紫杉醇處理前后Bim的mRNA和蛋白的表達(dá)水平；線粒體分離和Westernblot檢測(cè)Bim蛋白的移位；采用蛋白合成抑制劑CHX佐證Bim的表達(dá)與紫杉醇誘導(dǎo)的胃腺癌細(xì)胞凋亡的關(guān)系。 結(jié)果：紫杉醇誘導(dǎo)胃腺癌細(xì)胞凋亡具有劑量和時(shí)間依賴性。SGC-7901胃腺癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇較敏感，而B(niǎo)GC-823胃腺癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇誘導(dǎo)的凋亡具有相對(duì)抵抗性。廣譜caspa

4、se抑制劑Z-VAD-fmk能有效抑制紫杉醇誘導(dǎo)的胃腺癌細(xì)胞凋亡，凋亡抑制率達(dá)60％以上，因而紫杉醇誘導(dǎo)的的胃腺癌細(xì)胞凋亡極大程度上依賴于caspases。Bim的蛋白表達(dá)水平在紫杉醇處理的SGC-7901中有顯著升高，而在BGC-823中無(wú)明顯變化，這是由于存在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)導(dǎo)致BimmRNA表達(dá)升高繼而引起B(yǎng)im蛋白表達(dá)上調(diào)。紫杉醇能誘導(dǎo)胃腺癌細(xì)胞系SGC-7901及BGC-823中Bim移位于線粒體膜，導(dǎo)致其活化形式增加。此外，蛋