Bcl-2在紫杉醇耐藥胃腺癌細胞中的表達及意義.pdf

1、背景及目的:胃癌是我國常見的惡性腫瘤,化療是胃癌患者治療的主要手段之一。紫杉醇作為胃癌化療的一線藥物,因其在臨床初始化療緩解后常產生耐藥性,嚴重影響患者治療效果,成為限制紫杉醇臨床應用的重要因素。近年來,大量通過建立紫杉醇耐藥的腫瘤細胞株探討紫杉醇耐藥機制的研究表明:P-糖蛋白、微管β亞基和α亞基表達的改變,以及凋亡途徑中相關分子的表達異常均與紫杉醇耐藥性有關。Bcl-2家族中的抗凋亡蛋白被認為在腫瘤化療藥耐藥中發(fā)揮重要作用。本研究旨在

2、通過探討 Bcl-2蛋白在紫杉醇耐藥的胃腺癌細胞中的作用,更好的了解胃腺癌細胞耐藥的分子機制,以尋找克服腫瘤細胞耐藥的有效途徑。
　　方法:采用藥物濃度梯度遞增持續(xù)作用法建立耐紫杉醇SGC-7901/TAX細胞株。應用倒置顯微鏡觀察耐藥株SGC-7901/TAX的形態(tài)學變化。采用不同濃度紫杉醇在不同時間點處理SGC-7901與SGC-7901/TAX細胞株。通過PI染色法流式細胞術檢測細胞凋亡率。通過MTT比色法檢測細胞生存率變化

3、。通過Western blot檢測XIAP、CIAP1、CIAP2、mcl-1、Bax、Bcl-2、Bcl-xl的蛋白變化。通過RT-PCR法檢測Bcl-2 mRNA水平的變化。SiRNA沉默Bcl-2基因后,Western blot檢測轉染前后Bcl-2蛋白水平的變化,流式細胞術檢測凋亡率的變化,MTT比色法檢測生存率變化。
　　結果:耐紫杉醇胃腺癌細胞系SGC-7901/TAX較胃腺癌細胞系 SGC-7901有明顯的形態(tài)差異,

4、耐藥細胞株形態(tài)不規(guī)則,體積較親本細胞株稍大,可見瘤巨細胞和凹陷。紫杉醇誘導胃腺癌細胞凋亡具有時間和劑量相關性,耐藥胃腺癌細胞株對紫杉醇誘導的凋亡不敏感,紫杉醇處理后Western blot檢測到耐藥細胞株中有Bcl-2的上調,親本細胞株Bcl-2則表達下調。半定量PCR檢測耐藥胃腺癌細胞株中Bcl-2 mRNA水平也是上調的;在耐藥胃癌細胞株中沉默Bcl-2后,Bcl-2蛋白水平下調,細胞凋亡率明顯上升,細胞生存率顯著下降。