肺癌患者免疫狀態(tài)的綜合評價及化療對其免疫狀態(tài)的影響.pdf

1、目的意義：肺癌的發(fā)病與死亡近10年來一直居惡性腫瘤之首位，嚴重威脅著人類的健康。且80％以上的肺癌患者確診時已屬晚期，全身化療為主的綜合治療成為主要治療方法?；煵粌H有效率非常有限，而且作為一種非特異性細胞毒治療方法，在殺傷腫瘤細胞的同時損傷人體的正常組織，個別患者不但未能從化療受益，反而導致病情進展，生存時間縮短。這使我們意識到化療的負面影響，引起了對免疫治療的重視。但是由于目前除個別腫瘤外尚無資料證明單用生物療法可以治愈晚期癌癥，故

2、多作為輔助支持治療方法。由于缺乏有效的理論指導，免疫治療在臨床上存在著盲目用藥。本研究從三個層面綜合評價了肺癌患者的免疫狀態(tài)及化療對免疫狀態(tài)的影響，從而為肺癌患者的免疫治療提供理論依據(jù)。 材料和方法： (1)應用流氏細胞儀對2002年至2006年4月間189例肺癌患者外周血中的免疫細胞進行檢測，運用SAS6.02軟件以不齊方差t檢驗分析外周血T細胞亞群、B淋巴細胞及NK細胞，在不同分期、KPS評分及單灶轉移與多灶轉移間的

3、差異，并著重以重復測量的實驗設計方法分析了102例化學治療前后肺癌患者免疫狀態(tài)的變化，以t檢驗分析了累積化療周期數(shù)>4周期與≤4周期兩組間的差別；并以一般2×2列聯(lián)表的卡方檢驗方法分析可預測療效的免疫指標。 (2)應用流式細胞儀檢測2005年6月至2006年4月間103例肺癌患者外周血中活性T淋巴細胞：CD3+HLA-DR+、CD4+CD25+、CD8+CD28+細胞的百分數(shù)，采用細胞內因子測定法用流式細胞儀檢測Th細胞亞群百分

4、數(shù)；運用SAS6.02軟件以不齊方差t檢驗分析了以上指標在不同KPS評分、TNM分期及單灶與多灶轉移間的差別，并重點用重復測量的實驗設計方法分析了83例肺癌患者化療前后各免疫指標的變化，以不齊方差t檢驗分析了累積化療周期數(shù)>4周期與≤4周期兩組間的差別；以一般2×2列聯(lián)表的卡方檢驗方法分析可預測療效的免疫指標。 (3)采用競爭性定量RT-PCR技術對2005年6月至2006年4月間47例肺癌患者化療前及化療1周期結束后抗凝外周血

5、標本進行檢測，并以重復測量的實驗設計方法分析了化療前與化療1周期結束后三種殺傷因子FasL、Granzyme B和Perforin的轉錄水平，以及累積化療周期數(shù)>4周期與≤4周期兩組間殺傷因子轉錄水平的差別；采用一般2×2列聯(lián)表卡方檢驗法分析三種殺傷分子基因表達水平的變化與療效的關系，以找出可預測療效的免疫指標。 結果： 1，肺癌患者外周血T淋巴細胞亞群、B細胞和NK細胞水平及化療對其影響。 (1)化療1周期結束

6、后與化療前相比較，免疫指標CD3+CD4+細胞百分數(shù)，CD4+/CD8+比值較化療前下降有統(tǒng)計學意義(P≤0.05)，NK細胞及B細胞水平降低無統(tǒng)計學意義。 (2)化療累積周期數(shù)>4周期組與≤4周期組比較，CD3+、CD4+細胞水平、CD4+/CD8+比值均下降，且有統(tǒng)計學意義；CD8+細胞水平上升，有統(tǒng)計學意義。 (3)各指標對療效均無預測作用。 (4)不同TNM分期：Ⅳ期組與對照組相比較CD3+、CD3+CD

7、4+、NK細胞百分數(shù)及CD4+/CD8+比值下降，均有統(tǒng)計學意義，CD3-CD8+百分比上升且有統(tǒng)計學意義，B淋巴細胞變化無統(tǒng)計學意義。各免疫指標差異于Ⅲ期與Ⅳ期間無統(tǒng)計學意義。 (5)KPS評分<70分組較KPS評分≥70分組，CD4+/CD8+比值和NK細胞水平均下降，且有統(tǒng)計學意義(P≤0.05)。 (6)多灶轉移組與單灶轉移組比較，CD3+CD8+細胞水平升高且有統(tǒng)計學意義(P≤0.05)；CD4+/CD8+比值

8、降低且有統(tǒng)計學意義(P≤0.05)。 2，肺癌患者外周血中活性T淋巴細胞的水平及化療對其影響。 (1)化療1周期結束后與化療前相比，CD4+CD25+T淋巴細胞比例上升，有統(tǒng)計學意義(P≤0.05)，其它指標差異無統(tǒng)計學意義。 (2)化療累積周期數(shù)>4周期組與≤4周期組比較， CD3+HLA-DR+、CD8+CD28+及Th1細胞水平下降且有統(tǒng)計學意義；CD4+CD25+及Th2細胞水平均上升，有統(tǒng)計學意義。

9、 (3)可預測療效的指標：CD4+CD25+T淋巴細胞上升則療效差，下降療效好，其他指標均對療效無預測作用。 (4)不同TNM分期：Ⅲ期組與對照組比較，只有CD3+HLA-DR+細胞水平降低，差異有統(tǒng)計學意義；Ⅳ期組與對照組比較，CD3+HLA-DR+、CD8+CD28+細胞水平下降均有統(tǒng)計學意義， CD4+CD25+與Th2細胞水平上升，且有統(tǒng)計學差異，rh0和Th1細胞水平變化無統(tǒng)計學意義。Ⅳ期組與Ⅲ期組比較，Th1細胞

10、水平下降有統(tǒng)計學意義。 (5)KPS評分<70分組較KPS評分≥70分組，CD4+CD25+細胞及Th2細胞水平上升，而CD8+CD28+細胞水平下降，且皆有統(tǒng)計學意義(P≤0.05)。(6)多灶轉移組與單灶轉移組比較，免疫指標CD8+CD28+細胞水平下降而CD4+CD25+、Th2細胞水平均上升，變化均有統(tǒng)計學意義(P≤0.05)。 3，肺癌患者外周血單個核細胞FasL、Granzym B、Perforin基因表達定

11、量分析及化療對其影響。 (1)化療1周期結束后與化療前比較，三種殺傷效應因子FasL、Granzyme B和Perforin基因轉錄水平均下降，有統(tǒng)計學意義。 (2)化療累積周期數(shù)>4周期組與≤4周期組比較，殺傷效應因子FasL、Granzyme B和Perforin基因轉錄水平均下降，有統(tǒng)計學意義。(3)Granzyme B、FasL的基因表達水平上升則療效好，下降療效差；Perforin對療效無預測作用。 結

12、論： 1，化療對免疫狀態(tài)的影響： ①化療1周期結束后，CD4+細胞百分數(shù)、CD4+/CD8+比值及三種殺傷效應分子FasL、Granzyme B和Perforin基因轉錄水平呈下降趨勢，均有統(tǒng)計學意義。CD4+CD25+T淋巴細胞比例上升，有統(tǒng)計學意義。以上結果提示化療1周期結束后較化療前，免疫抑制加重。 ②化療累積周期數(shù)>4周期組忠者與≤4周期組比較，CD3+、CD4+、CD3+HLA-DR+、CD8+CD28

13、+及Th1細胞水平及CD4+/CD8比值下降，CD8+、CD4+CD25+、Th2細胞水平上升均有統(tǒng)計學意義；三種殺傷效應分子FasL、Granzyme B和Perforin基因轉錄水平呈下降趨勢，均有統(tǒng)計學意義。以上結果提示化療累積周期數(shù)增多，細胞免疫抑制程度加重。 ③CD4+CD25+T淋巴細胞上升則療效差，下降則療效好；而殺傷因子GranzymeB、FasL的基因表達水平上升則療效好，下降則療效差，Perforin基因轉錄

14、水平與療效無關。 2，免疫狀態(tài)與一般情況的關系： ①免疫狀態(tài)受到TNM分期的影響：Ⅲ期組患者與對照組比較，NK細胞、CD3+HLA-DR+細胞水平及CD4+/CD8+比值下降，且有統(tǒng)計學意義；Ⅳ期組較對照組，除上述兩指標外，CD3+、CD3+CD4+、NK、CD3+HLA-DR+、CD8+CD28+細胞水平及CD4+/CD8+比值下降而CD3+CD8+、CD4+CD25+與Th2細胞水平上升均有統(tǒng)計學意義；Ⅳ期組與Ⅲ期組

15、比較，只有Th1細胞水平下降且有統(tǒng)計學意義。以上結果提示Ⅳ期組肺癌患者較Ⅲ期組免疫抑制程度加重。 ②受到KPS評分的影響：KPS評分<70分組較KPS評分≥70分組，CD4+/CD8+比值和NK、CD8+CD28+細胞水平下降而CD4+CD25+細胞及Th2細胞水平上升，均有統(tǒng)計學意義。以上結果提示KPS評分低的肺癌患者免疫抑制程度較評分高的患者嚴重。 ③多灶轉移組與單灶轉移組比較，CD8+CD28+細胞水平及CD4+/